微小RNA-125a-5p_对人鼻咽癌细胞增殖的影响及机制 .pdfVIP

山东医药2024年第64卷第7期

微小RNA-125a-5p对人鼻咽癌细胞

增殖的影响及机制

万芳竹1，2，3，张浩炯1，2，3，张宗璞4

1上海市质子重离子医院放疗科复旦大学附属肿瘤医院放疗科，上海201321；

2上海市放射肿瘤学重点实验室；3上海质子重离子放射治疗工程技术研究中心；

4复旦大学附属华山医院神经外科

摘要：目的探究微小RNA-125a-5p（miR-125a）对人鼻咽癌细胞（HK-1细胞）增殖的影响及机制。方法常规

培养HK-1细胞及人胚肾细胞永生化细胞系（293T细胞），将HK-1细胞随机分为对照1组、过表达miR-125a组（转染

miR-125amimics）、沉默miR-125a组（转染miR-125ainhibitor）；另取部分HK-1细胞随机分为对照2组、miR-125a过

表达组（转染miR-125amimics）及回补组［转染miR-125amimics同时过表达含PDZ结合基序的转录共激活因子

（TAZ）］。转染48h后检测miR-125a表达验证转染效率。用RT-qPCR法检测miR-125a-5p、TAZmRNA；用Western

blotting法检测TAZ蛋白；CCK-8实验、集落形成实验检测细胞增殖能力；通过预测网站TargetScan（http：//tar⁃

/）和miRDB（http：///）预测miR-125a与TAZ的结合位点。将293T细胞随机分为4组，WT+miR-ctrl

组共转染TAZ野生型（TAZ-WT）和miR-125a空载对照（miR-ctrl）、Mut+miR-ctrl组共转染TAZ突变型（TAZ-MUT）和

miR-ctrl、WT+miR-125a组共转染TAZ-WT和miR-125a模仿物（miR-125a）、Mut+miR-125a组共转染TAZ-MUT和

miR-125a，用双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-125a的下游靶点。结果对照1组、过表达miR-125a组、沉

默miR-125a组miR-125a的相对表达量比较差异有统计学意义（P均0.05）。对照1组、过表达miR-125a组、沉默

miR-125a组转染后第2、3、4、5、6天增殖活力（OD

值）比较差异均有统计学意义（P均0.05）、集落形成数比较差异

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有统计学意义（P均0.05）。对照1组、过表达miR-125a组、沉默miR-125a组TAZ蛋白相对表达量比较差异有统计

学意义（P均0.05）。网站预测显示miR-125a与TAZ存在结合位点，设计突变型序列（TAZ-3’UTRMT），miR-125a

与TAZ的非编码区结合，miR-125a的直接下游靶点为TAZ。WT+miR-125a组相对荧光强度低于WT+miR-ctrl组、

Mut+miR-ctrl组（P均0.05），Mut+miR-125a组相对荧光强度与WT+miR-ctrl组、Mut+miR-ctrl组比较差异无统计学

意义（P均0.05）。对照2组、miR-125amimics组、miR-125amimics+TAZ组转染后第2、3、4、5、6天增殖活力比较差

异有统计学意义（P均0.05），集落形成数比较差异有统计学意义（P均0.05）。结论miR-125a可抑制鼻咽癌细

胞增殖，其作用机制与抑制其下游靶点TAZ的表达有关。

关键词：鼻咽癌；微小RNA-125a；含PDZ结合基序的转录共激活因子；细胞增殖

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2024.07.003

中图分类号：R739.6