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新型表达骨形态发生蛋白2腺病毒真核
细胞载体的构建和鉴定
（作者:___________单位:___________邮编:___________）
作者：张正，刘丹平，陈峻江，郭韬，张男
【摘要】目的构建同时表达具有抗原表位FLAG标记的骨形态发生
蛋白2(BMP2)目的蛋白和报告分子绿色荧光蛋白(GFP)的新型腺病毒
真核细胞表达载体。方法将去除翻译终止密码子并添加新的酶切识
别位点XhoⅠ的BMP2基因定向连入腺病毒穿梭质粒pShuttle
CMV-IRES-hrGFP-1。携带BMP2+基因的重组腺病毒穿梭质粒经酶切鉴
定、PmeⅠ酶切线性化后转化BJ5183-AD-1大肠杆菌，利用细菌内同
源重组机制将BMP2+和GFP基因连同其顺势表达元件重组入腺病毒基
因组质粒。用PacⅠ酶切去除其质粒成分，暴露腺病毒基因组的反向
末端重复序列，转染293细胞，进行腺病毒的包装，完成新型腺病毒
载体AdCMV-BMP2+-IRES-GFP-1的构建。作为阳性对照，同时制备多
年来广为应用的BMP2腺病毒表达载体AdCMV-BMP2。以两种载体感
染骨髓基质细胞，通过RT-PCR和荧光显微镜分别检测骨形态发生蛋
白2和绿色荧光蛋白表达情况;通过碱性磷酸酶活性检测判断BMP2诱
导成骨分化作用。结果突变后骨形态发生蛋白2基因序列、重组腺
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病毒穿梭质粒和重组腺病毒质粒酶切图谱符合预定设计。感染骨髓基
质细胞后，新型腺病毒载体可同时表达报告分子GFP和具有诱导成骨
分化活性的BMP2。结论成功构建表达BMP2的新型腺病毒载体。
【关键词】骨形态发生蛋白2基因;绿色荧光蛋白;腺病毒载体;同源
重组;成骨诱导
Abstract:ObjectiveToconstructanovelrecombinant
adenovirusvectorexpressingtheBMP2fusedtoFLAGepitopeand
greenfluorescentprotein(GFP)asareporteronthesame
transcript.MethodsThebasicpairsofBMP2behindthe
translationstoppingcodonTAGwereremovedandaXhoⅠ
restrictionsitewasaddedfollowingtheendofthemutant.Then,
themutantofBMP2gene(BMP2+gene)wasligatedintothe
multiplecloningsitesoftheadenovirusshuttleplasmid
pShuttleCMV-IRES-hrGFP-1bymeansofthedirectionalcloning
technology.Oncetestedbyrestrictiondigestion,theshuttle
plasmidwaslinearizedwithPmeIandtransformedinto
BJ5183-AD-1cellstorecombinethegenesofBMP2+andGFP
togetherwiththeircis-actingelementsintoadenoviral
plasmidthroughanewsimplifiedbacterialhomologous
recombinantmethod.Toexposeitsinverstedterminalrepeats,
therecombinantadenoviralplasmidsweredigestedwithPac
Ⅰ,andwerethenusedto293transfectedcellstogeneratethe
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