布鲁氏菌104M疫苗株敲除Per基因的重组菌及应用 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN107267432A

(43)申请公布日2017.10.20

(21)申请号CN201610214118.3

(22)申请日2016.04.07

(71)申请人中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所

地址100071北京市丰台区东大街20号

(72)发明人李山虎王秉翔周建光王莹

(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司

代理人关畅

(51)Int.CI

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

布鲁氏菌104M疫苗株敲除Per基

因的重组菌及应用

(57)摘要

本发明公开了一种布鲁氏菌104M

疫苗株敲除Per基因的重组菌及应用。本

发明提供了重组菌，为降低和/或抑制布鲁

氏菌104M中Per蛋白活性得到的菌。本发

明的实验证明，本发明经过敲除布鲁氏菌

104M的毒力基因Per得到重组菌，通过对

其毒力和免疫原性的研究，筛选出人用布

鲁氏菌减毒疫苗候选株△Per。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.重组菌,为降低和/或抑制布鲁氏菌104M中Per蛋白活性得到的菌。

2.根据权利要求1所述的重组菌,其特征在于:所述降低和/或抑制布鲁氏菌104M中

Per蛋白活性为抑制或沉默布鲁氏菌104M中Per蛋白编码基因的表达。

3.根据权利要求2所述的重组菌,其特征在于:所述抑制或沉默布鲁氏菌104M中Per

蛋白编码基因的表达为敲除布鲁氏菌104M中Per蛋白编码基因。

4.根据权利要求3所述的重组菌,其特征在于:所述敲除布鲁氏菌104M中Per蛋白编

码基因为将布鲁氏菌104M中Per蛋白编码基因替换为抗性基因。

5.根据权利要求4所述的重组菌,其特征在于:所述布鲁氏菌104M中Per蛋白编码基

因替换为抗性基因均采用基因组定点编辑或同源重组的方式进行;

所述同源重组具体为λ-red同源重组或sacB基因介导筛选的同源重组或自杀质粒介

导的同源重组。

Claim6.根据权利要求4或5所述的重组菌,其特征在于:所述布鲁氏菌104M中

Per蛋白编码基因替换为抗性基因为将含有抗性基因的同源重组片段导入布鲁氏菌

104M中;

所述含有抗性基因的同源重组片段包括Per蛋白编码基因上游同源臂、抗性基因和

Per蛋白编码基因下游同源臂。

7.根据权利要求6所述的重组菌,其特征在于:所述含有抗性基因的同源重组片段通

过重组载体导入布鲁氏菌104M中;

所述重组载体为将含有抗性基因的同源重组片段插入表达载体得到的载体。

Claim8.根据权利要求6或7所述的重组菌,其特征在于:

所述抗性基因为kan;

所述含有所述抗性基因的同源重组片段的核苷酸序列为序列1。

Claim9.权利要求1-8中任一所述的重组菌在制备如下1)-5)中任一种产品中的应

用。

1)、布鲁氏菌减毒疫苗;

2)、布鲁氏菌疫苗;

3)、促进CD3+、CD4+和/或CD8+细胞增加产品;

4)、提高CD4+细胞与CD8+细胞的数量比产品;

5)、提高细胞因子IL-2的含量和/或降低细胞因子IL-4含量产品。

10.一种如下1)-5)中任一种产品,其活性成分为权利要求1-8中任一所述的重组菌;

1)、布鲁氏菌减毒疫苗;

2)、布鲁氏菌疫苗;

3)、促进CD3+、CD4+和/或CD8+细胞增加产品;

4)、提高CD4+细胞与CD8+细胞的数量比产品;

5)、提高细胞因子IL-2的含量和/或降低细胞因子IL-4含量产品。

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域,尤其涉及一种布鲁氏菌104M疫苗株敲除Per基因的重