罗汉果组培快繁技术实例-·-含配方.docx

罗汉果：葫芦科多年生藤本植物的果实。别名拉汗果、假苦瓜、光果木鳖、金不换、罗汉表、裸龟巴，被人们誉为“神仙果”，其叶心形，雌雄异株，夏季开花，秋天结果。主要产于广西壮族自治区桂林市永福县龙江乡、龙胜和百寿等镇，永福县和龙胜县是罗汉果之乡种植历史比较悠久，其中永福种植罗汉果已经有300多年历史，龙胜县种植罗汉果已经有200多年历史，中国百分之九十罗汉果产于永福县和龙胜县，罗汉果是桂林名贵的土特产，也是国家首批批准的药食两用材料之一，其主要功效是能止咳化痰。果实营养价值很高，含丰富的维生素C（每100克鲜果中含400毫克～500毫克）以及糖甙、果糖、葡萄糖、蛋白质、脂类等。

罗汉果的传统生产采用块茎和压蔓等进行无性繁殖，繁殖系数低，且长期采用无性繁殖导致种质退化和病毒积累，产量和品质下降，满足不了农户扩大种植面积的需求，严重制约了罗汉果产业的发展。利用组织培养进行种苗繁殖，是罗汉果良种快繁和控制罗汉果病毒病蔓延的有效途径，具所用繁殖材料少、增殖系数大、苗整齐和脱病毒等特点，所繁殖的脱毒苗能满足生产的大量需求。从20世纪80年代起，就有很多研究学者从事罗汉果组织培养的研究，并获成功。

一茎段培养

罗汉果最常见的组培方法是以茎段为外植体进行培养(蔡时可等，2005)。

1.1培养条件

(1)诱导培养基MS+6-BA1.0mg／L+IBA0.2mg／L。

(2)增殖培养基MS+6-BA1.0～2.0mg／L+IBA0.2mg／L。

(3)生根培养基MS+IBA0.2mg／L。

培养基用适量琼脂固化，蔗糖浓度30g／L，pH5.8。培养温度25～30℃，光照强度1000lx，光照时间10～12h／天。

1.2取材与消毒

从罗汉果植株上取5～10cm嫩梢为外植体，切去叶片，洗净备用。在超净工作台上用75％酒精将外植体预消毒10s，然后切成带1个节、长0.5～1.0cm的茎段，再用添加数滴0.1％HgCl2溶液消毒7～10min，用无菌水冲洗3～4次，最后接种在诱导培养基上进行诱导培养。

1.3诱导培养

将罗汉果茎段接种于诱导培养基上培养30天后，黄绿色的腋芽从叶腋处被诱导出来，诱导率达99％以上，茎段基部产生白色海绵状愈伤组织。

1.4增值培养

待腋芽长到4～6cm时，将其切成带1个节的茎段，接种在增殖培养基上。25天后腋芽被重新诱导和生长，增殖倍数达4～6倍，但在第4代后容易从基部诱导出丛芽，增殖倍数最高可达12倍。

1.5生根培养

将3～5cm高的腋芽切割后接种在生根培养基上进行生根培养。培养10天后就开始诱导出白色根系，培养30天生根率达95.8％。

又据周凤珏等(2007)报道，采用野生翅子罗汉果植株新生藤蔓的茎段为外植体，以MS+NAA0.1mg／L+LFS(灵发素)0.2mg／L培养基上进行诱导培养，15～20天诱导率达90％～100％；于MS+LFS0.2mg／L上进行继代增殖和生根，培养25～30天，苗高达4～7cm，平均增殖倍数3.7，生根率达95％以上。

二茎尖脱毒培养

由于罗汉果花叶病的流行，许多种植园都感染花叶病毒，导致单位面积减产，品质下降，经济效益大大降低。杭玲等(1999)采用了组织培养方法培育罗汉果无毒苗。供试材料为罗汉果的青皮果品种，采用种子播种的实生苗，以受感染花叶病毒而致病的植株的茎尖为外植体，接种于MS+6-BA1.0mg／L+IAA0.1mg／L培养基上进行诱导培养，长至5cm高时，置于生长培养箱内于38℃下培养1周后，切取2mm大小茎尖接种在诱导培养基上按常规方法培养，培养3周后，长势良好，成苗率达100％。经检查，脱毒率达100％。当小苗长至5～7cm高时，切成长0.5cm左右，带一个节间的茎段转入增殖培养基MS+6-BA0.5mg／L+IAA0.1mg／L+IBA0.1～0.5mg／L(或NAA0.1～0.5mg／L)进行增殖培养。生根培养基以MS+NAA0.1mg／L或MS+IBA0.1～0.5mg／L为宜。生根苗的移栽成活率达90％。用汁叶摩擦法接种于指示植物上进行病毒检测，结果表明组培苗已完全脱毒。

黄燕芬等(2005)采取贵州贞丰栽培的3个罗汉果品种：红毛2号、青皮果和拉江果的茎尖和茎段为外植体，接种于诱导培养基MS+6-BA0.5～1.0mg／L+IAA0.2mg／L上进行诱导培养，15天后即可诱导出芽；将芽转接到培养基MS+6-BA0.5mg／L+IAA0.1mg／L+IBA0.1mg／L中进行增殖培养，每20天继代1次，增殖系数达8.5；将芽苗转人生根培养基MS+NAA0.1mg／L中进行生根培养，30天可诱导生根并壮苗。

三其他器官培养

黄春梅等(2005)以罗汉果胚轴为外植体，在Ms+6-BA4.0mg／L+IA