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８５６ＩＳＳＮ１００７—８７３８细胞与分子免疫学杂志（Ｃｈ—ｉｎＪＣｅｌＭｏｌｌＩｍｍ—ｕｎｏ１）２００７，２３（９
论著・文章编号：１００７—８７３８（２００７）０９—０８５６—０３
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ＦＩＯ蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
付欣，邹东霆，周问渠，邢福祺，李冰
广州医学院实验医学研究中心，广东广州５１０１８２；（南方医科大学附属南方医院妇产科，广东广州５１０５１５）
ＰｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＦＩＯａｎｄｐｒｅｐ—体。方法：利用ＰＣＲ方法扩增Ｆ１０基因片段，经ＢａｍＨＩ和
＆ｏＲＩ酶切后连接人ｐＥＴ—ＧＳＴ原核表达载体，构建的ｐＥＴ－
ａｒａｔｉｏｎｏｆｉｔｓｐｏｌｙｃｉｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ
ＧＳＴ／Ｆ１０融合重组表达质粒转化大肠杆菌ＢＩ２１，经ＩＦＦＧ诱
导表达蛋白，并以亲和层析的方法进行纯化。表达产物用
ＦＵＸｉｎ，ＺＯＵＤｏｎｇ．ｔｉｎｇ，ＺＨＯＵＷｅｎ—ｑｕ，ＸＩＮＧＦｕ—
ＳＤＳ．ＰＡＧＥ电泳和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ进行分析鉴定。以纯化的Ｆ１０
ｑｉ，ＬＩＢｉｎｇ蛋白免疫新西兰大白兔，制备兔抗Ｆ１０的多克隆抗体，并以
ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＧｕａｎｇｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌ—ＥＬＩＳＡ法检测抗体效价。结果：经酶切和核酸序列分析证实
ｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０１８２；ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓａｎｄＧｙｎｅｃｏｌ—重组质粒包含有正确编码的Ｆ１０读码框。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳分
ｏｇｙ，ＮａｎｆａｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ析显示ｐＥＴ—ＧＳＴ／Ｆ１０诱导后表达一相对分子质量（）约为
５１０５１５．Ｃｈｉｎａ６１０００的融合蛋白，与预期结果相符。目的蛋白纯化后的纯
度达９０％以上，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实该蛋白是ＧＳＴ／Ｆ１０的融合蛋
ＡｂｓｔｌｒａｃｔＩＡ：Ｔ０ｉｎｄｕｃｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＦＩＯｉｎ
白。将纯化的ＧＳＴ／ＦＩＯ融合蛋白免疫家兔，得到的兔抗Ｆ１０
Ｅ，ｃｏｉｌａｎｄｐｒｅｐａｒｅｔｈｅｒａｂｂｉｐｏｌｔｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔｉｔ．抗体效价达１：２００００。结论：成功构建了人Ｆ１０基因原核表
ＭＥＴＨＯＤＳ：ＴｈｅｇｅｎｅｏｆＦＩＯｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙＰＣＲ，ａｎｄ达载体，并获得了高纯度的Ｆ１０重组蛋白及兔抗Ｆ１０抗体，
ｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＥＴ－ＧＳＴｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｒｅｃｏｍ－为下一步研究Ｆ１０基因功能奠定了实验基础。
ｂｉｎａｎｔｅｘｐ
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