DB14∕T 1515-2017 食用百合脱毒试管苗繁育技术规程.docx

ICS65.020.20B05

DB14

山西省地方标准

DB14/T1515—2017

食用百合脱毒试管苗繁育技术规程

2017-12-10发布2018-02-10实施

山西省质量技术监督局发布

I

DB14/T1515—2017

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4生产设施和仪器设备 2

5培养基 2

6环境消毒和无菌操作 2

7脱毒母株的获取 3

8脱毒试管苗鳞茎的诱导和增殖 3

9脱毒试管鳞茎生根 4

10脱毒试管鳞茎的移栽 4

II

DB14/T1515—2017

前言

本标准按照BG/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山西农业大学提出并归口。

本标准起草单位：山西农业大学。

本标准主要起草人：赵娟、温银元、尹美强、张彬、王计平、宋喜娥、董淑琦、原向阳、王玉国、郭平毅。

1

DB14/T1515—2017

食用百合脱毒试管苗繁育技术规程

1范围

本标准规定了食用百合脱毒试管苗（鳞茎）繁育的生产设施和仪器设备、培养基、环境消毒和无菌操作、脱毒母株的获取、脱毒试管苗鳞茎的诱导和增殖、脱毒试管鳞茎生根及脱毒试管鳞茎的移栽。

本标准适用于食用百合脱毒试管苗的繁育。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T1491花卉植物病毒检测规程

NY/T1744切花百合脱毒种球

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

脱毒试管苗

在无菌条件下，应用茎尖组织培养技术获得，不带LSV（百合无症病毒）、CMV（黄瓜花叶病毒）、LMoV（百合斑驳病毒）病毒的，在封闭容器内繁殖的种苗。

3.2

鳞片

着生在鳞茎盘上的叶基或者叶鞘膨大而成的变态叶。3.3

鳞茎

在短缩茎盘省着生的肉质叶鞘膨大而成的变态器官。3.4

脱毒试管鳞茎

无菌条件下，在封闭培育容器内由脱毒试管苗诱导形成的鳞茎。3.5

2

DB14/T1515—2017

籽球

通过组培苗或鳞片繁殖形成的周长小于3cm的小鳞茎。

4生产设施和仪器设备

4.1生产设施

准备室、无菌室、培养室、检测室、温室等。

4.2主要仪器设备

超净工作台、压力蒸汽灭菌锅、鼓风干燥箱、光照培养箱、人工气候箱、冰箱体式显微镜（双筒解剖镜）、空调、照度计、自动控时器、温湿度计、酶标仪、高速冷冻离心机、电泳仪、电泳槽、PCR仪、微量移液器、电子天平、pH计、磁力搅拌器、电冰箱、移液枪、各种培养容器等。

5培养基

选用MS培养基（Murashige﹠Skoog(1962)）为基本培养基。

5.1MS培养基母液的配制

按MS培养基标准成分配制。配制母液时，大量元素、微量元素、铁盐各成分依次加热溶解后混合，冷却后定容，铁盐需装入棕色试剂瓶。各母液配制好后均放置在冰箱中4℃条件下保存，使用时根据培养基配制量取适量母液。

5.2植物生长调节剂母液的配制

植物生长调节剂配制成浓度为0.5mg/mL～1mg/mL的母液。配制时，先用1mL～2mL95%乙醇溶解（溶解IBA、NAA）或0.1mol/L的HCl（溶解6-BA、KT）溶解，再用无菌蒸馏水定容至所需浓度，摇匀后贮于棕色试剂瓶中，置于4℃冰箱中保存。

5.3培养基的制备

配制时，先将培养基基本成分（大量元素、微量元素、铁盐、有机物）按照需要量加入量筒中，再分别加入不同浓度需用量的各种激素，定容后加入糖和琼脂，放入蒸煮锅内煮开，用0.1mol/L的HCl或NaOH调节pH值至5.6～5.8，分装于试管或三角瓶等容器中，用封口膜（盖）封口，放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌。灭菌时工作压力稳定在1.1kg/cm2（0.105MPa），温度为121℃,灭菌时间20min。灭菌后置于试管架或存放架上冷却待用。

6环境消毒和无菌操作

6.1环境消毒

接种前，提前30min开启无菌室室内和超净工作台紫外灯照射消毒，关灯后15min～20min工作人员方可进入室内操作。室内若有浮尘，可用75%乙醇或1%苯扎溴铵溶液（新洁儿灭消毒液）喷雾降尘。每天工作结束后，清扫地面，可用有效氯含量5%～6%的次氯酸钠（NaClO）溶液（84消毒