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藜麦中齐墩果酸含量的测定高效液相色谱法

1范围

本标准规定了藜麦中齐墩果酸含量的测定方法高效液相色谱法。

本标准适用于藜麦中齐墩果酸含量的测定。

2规范性引用文件

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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3方法原理

齐墩果酸在甲醇-盐酸溶液超声水解的方法下转化成齐墩果酸苷元，用高效液相色谱-紫外检测器测定，以保留时间定性，外标法定量，以齐墩果酸苷元的含量来定量藜麦中齐墩果酸的含量。

4试剂与材料

4.1试剂

4.1.1甲醇：色谱纯。

4.1.2盐酸：分析纯。

4.1.3乙酸铵：优级纯。

4.1.4水为符合GB/T6682规定的一级水。

4.2试剂配制

4.2.1盐酸溶液（3mol/L）：量取250mL盐酸，用水稀释至1000mL，混匀。

4.2.2乙酸铵溶液（0.1mol/L）：称取7.7g乙酸铵，加水溶解，定容至1000mL，混匀，经0.45μm微孔滤膜过滤后使用。

4.3标准品

齐墩果酸（C3OH4803，CAS：508-02-1），纯度≥98%。

4.4标准溶液配制

准确称取5mg（精确至0.01mg）齐墩果酸标准品，用甲醇溶解定容至10mL，即为500mg/L的标准储备液。于-18℃冰箱中贮存。临用前将溶液回温至室温。

5仪器与设备

5.1高效液相色谱仪（HPLC）：配紫外检测器。

5.2分析天平：感量为0.01mg和0.1mg。

5.3电热恒温水浴锅：0℃~100℃。

5.4数控超声波清洗器。

5.5微孔滤膜：0.45μm。

5.6高速万能粉碎机：10000r/min。

6分析步骤

6.1试样制备与提取

藜麦样品经高速万能粉碎机粉碎成细粉末状，准确称取0.5g（精确至0.1mg）于250mL磨口锥形瓶中，加入甲醇溶液80mL，3mol/L盐酸溶液20mL，混匀密封瓶口，超声提取20min（期间振摇2-3次），再于沸水浴中冷凝回流水解1.5h，取出冷却，过滤提取液，吸取滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，待测。

6.2仪器参考条件

6.2.1色谱柱：C18（4.6×250mm，5μm）或性能相当者。

6.2.2流动相：0.1mol/L乙酸铵-甲醇（15+85）。

6.2.3检测波长：215nm。

6.2.4柱温：30℃。

6.2.5流速：1.0mL/min。

6.2.6进样量：10μL。

6.3标准曲线的制作

将标准溶液分别稀释配制成0mg/L、0.2mg/L、1.0mg/L、5.0mg/L、10mg/L、50mg/L、100mg/L，依次由低浓度到高浓度进样检测，分别以质量浓度X（mg/L）为横坐标，以响应值Y（峰面积）为纵坐标，进行线性回归，得到标准曲线回归方程。

6.4试样溶液的测定

将待测液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，测定相应的峰面积。根据标准曲线回归方程计算得到待测液中齐墩果酸的浓度，响应值应在标准曲线范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。

7结果计算

试样中齐墩果酸含量按式（1）计算：

ω=p根0000…………(1)

式中：

ω——试样中齐墩果酸的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

ρ——待测液中齐墩果酸的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；

V——制备试样的体积，单位为毫升（mL）；

f——试样稀释倍数；

m——试样质量，单位为克（g）。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

8精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

附录A

（规范性附录）

齐墩果酸标准溶液色谱图

齐

齐

齐墩果酸标准溶液色谱图见A.1

1.00mV(x100)0.750.500.250.00酸Detector

1.00mV(x100)

0.75

0.50

0.25

0.00

酸

墩果

0.05.010.015.020.0min

A.1齐墩果酸标准溶液色谱图（100mg/L）