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HCV核心区基因的截短及其表达
【摘要】目的高效稳定地表达HCV的
核心抗原。方法设计一对特异性引物，以
含HCV全长基因的质粒pBRTM/HCV1-3011
为模板，扩增出HCV截短的核心抗原的基因，
克隆于表达载体pGEX-4T3,并转化于大肠杆
菌BL21,IPTG诱导HCV截短的核心抗原的表
达，表达产物经过
SDS,Western-blot,ELISA等一系列鉴
定试验进行了分析。结果成功地构建了HCV
核心抗原高效稳定表达的重组质粒，表达产
物具有高度特异性和良好的抗原活性。结论
该抗原的获得为研制诊断用HCV抗原奠定了
基础。
【关键词】HCV；核心区基因；截短；表
达
TruncationandexpressionofHCVCore
gene
【Abstract】ObjectiveToexpressHCV
CoreantigenhightlyandApairsof
specificPCRprimersweredesignedand
HCVCoregenewasamplifiedfromthe
plasmidpBRTM/HCV1-3011bygene
fragementwasclonedintopGEX-4T3,then
transformedtoBL21andexpressedunder
inductionofIPTG.Theexpressedproduct
wasanalyzedbySDS,Western-blot
andindirectELISA,Arecombinant
plasmidstableandhightexpression
wasconstructedsuccessfully.The
expressedproductshowedhigh
specificityandgoodTheexpressionof
truncatedHCVCoreantigenslaida
foundationfordevelopmentofHCV
diagnostisuseantigens.
【Keywords】HCV；Coregene;Truncation；
expression
丙型肝炎病毒的核心蛋白是HCV蛋白中抗
原性强且保守性较好的区段，核心抗体出现
时间早，大约于感染后8～12周即可检出，
且持续的时间长，阳性率高，是HCV诊断必
不可少的抗原之一［1］。为了研制HCV诊断
用抗原，最初构建了含HCV全长核心基因的
重组表达质粒，但该质粒表达不稳定。参照
有关文献［2～4］，笔者将HCV的核心基因
截短，构建了重组表达质粒，该质粒能够高
效稳定地表达，现将结果报告如下。
1材料与方法
实验材料含HCV全长基因的质粒pBR
TM/HCV1-3011由武汉大学生命科学学院叶
林柏教授惠赠；pGEX-4T3购自Amersham
Biosciences公司；pGEM-T载体为Promega
公司产品；大肠杆菌JM109,DH5α和BL21
均由武汉生物制品研究所诊断用品室保存。
限制性内切酶、T4DNA连接酶及TaqDNA聚合
酶为Fermentas公司产品；凝胶回收试剂盒
为QIAGENGmbH公司产品；序列分析由宝生
物工程公司完成。IPTG购于Fermentas公司；
GST融合蛋白纯化试剂盒为Amersham
Biosciences公司产品；鼠抗HCVCore抗原
和NS3抗原的两种单克隆抗体购自ViroStat
公司；HRP标记的羊抗鼠IgG为NovoGene
Bioscience公司产品；DAB浓缩显色液为华
美生物工程公司产品；ELISA所用试剂，除
抗原外，均为武汉所的HCV抗体诊断试剂盒
的组份；标化血清由武汉所诊断用品室根据
第5代HCV-Ab国家参比品(Panel)标定的血
清样品。
引物的设计与合成根据pBRTM/HCV
1-3011全长基因序列，设计扩增HCV截短的
(1-120aa)核心抗原基因片段的特异引物。
上游引物(L)：5’
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