Wnt5a在小鼠牙骨质发育中的表达特点及其对成牙骨质细胞分化的影响.pdfVIP

Wnt5a在小鼠牙骨质发育中的表达特点及其对成牙骨质细胞

分化的影响

包幸福;倪宇昕;李莹;郭小凯;王玉琢;方蛟;胡敏

【摘要】目的:探讨Wnt家族5A蛋白(Wnt5a)在小鼠出生后牙骨质中的表达特点

以及其对体外培养成牙骨质细胞分化的影响,阐明Wnt非经典通路调控牙根发育的

机制.方法:选择出生后0.5、4.5、10.5、16.5、20.5、24.5、26.5和30.5d昆明

小鼠并按以上相应时间点分组,每组3只;在相应时间点采用脱臼法处死小鼠,分离下

颌第一磨牙及牙周组织.免疫组织化学染色法观察小鼠牙体和牙周组织中Wnt5a的

表达特点.将小鼠成牙骨质细胞OCCM30分为实验组和对照组.实验组加入200

μg·L-1重组Wnt5a蛋白,对照组无添加;提取细胞总RNA.RT-PCR法检测2组

OCCM30细胞中Ocn、Opn、Alp、Bsp、Wnt5a和Runx-2基因的相对表达水

平.结果:小鼠出生后0.5d,第一磨牙牙胚中无Wnt5a阳性表达;出生后4.5d,成釉细

胞和成牙本质细胞中Wnt5a阳性表达较强;出生后16.5d,可见成牙骨质细胞中

Wnt5a呈阳性表达;出生后20.5～30.5d,成牙本质细胞和牙周膜细胞中Wnt5a呈

阳性表达.与对照组比较,实验组成牙骨质细胞中Ocn和Alp基因相对表达水平降

低(P＜0.05).结论:Wnt5a在牙根发育过程中的表达特点为从无到有,呈现规律性表

达;Wnt5a下调分化基因的表达,在牙骨质发育中发挥重要作用.

【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》

【年(卷),期】2018(044)003

【总页数】6页(P461-465,后插1)

【关键词】Wnt5a;牙发育;牙骨质;成牙骨质细胞;免疫组织化学

【作者】包幸福;倪宇昕;李莹;郭小凯;王玉琢;方蛟;胡敏

【作者单位】吉林大学口腔医院正畸科,吉林长春130021;吉林大学口腔医院种植

科,吉林长春130021;吉林大学口腔医院正畸科,吉林长春130021;吉林大学口腔医

院正畸科,吉林长春130021;吉林大学口腔医院正畸科,吉林长春130021;吉林大学

口腔医院种植科,吉林长春130021;吉林大学口腔医院正畸科,吉林长春130021

【正文语种】中文

【中图分类】R78;R332

牙骨质是覆盖在牙根表面的薄层矿化组织，具有锚定牙根和保护牙髓的作用。牙骨

质在牙根发育的中晚期开始形成，发育成熟后一般不进行改建[1-2]。牙骨质会在

牙根受到压力或细菌影响时发生吸收，而在刺激因素消失后进行新生。牙骨质发育

和再生的调控机制尚未完全清楚[3]。Wnt信号通路是一类保守的信号通路的总称，

依据下游信号分子的不同而被分为Wnt经典通路和Wnt非经典通路。Wnt家族

5A蛋白(Wnt5a)是Wnt非经典通路的典型激活剂，可以引起下游多种信号分子的

活化并发挥调控作用[4]。研究[5]显示：Wnt5a在发育中的牙囊细胞中呈阳性表达，

提示其参与了牙根和牙周组织的发育活动，但是其表达的具体特点尚不清楚。因此，

本研究以牙骨质作为研究对象，探讨Wnt5a在牙根发育中的调控作用，为阐明

Wnt非经典通路调控牙发育的机制提供理论依据。

1材料与方法

1.1动物、细胞、主要试剂和仪器24只SPF级昆明怀孕母鼠购自北京华阜康生物

科技公司，动物合格证号：SCXK(京)2014-0004。成牙骨质细胞OCCM30由美

国华盛顿大学Somerman教授赠送。免疫组织化学试剂盒PV9001(北京中杉金桥

公司，中国)，兔抗小鼠Wnt5a多克隆抗体(武汉博士德公司，中国)，DAB显色试

剂盒(福州迈新公司，中国)，DMEM培养基和胎牛血清(Gibco公司，美国)，总

RNA提取试剂盒(北京天根公司，中国)，反转录试剂盒及荧光实时定量试剂盒

(TaKaRa公司，日