RRM2对人胃癌细胞MKN-45增殖、侵袭及顺铂耐药作用的研究 .pdfVIP

RRM2对人胃癌细胞MKN-45增殖、侵袭及顺铂耐药作用

的研究

侯志斌;李菊英;苟笑丹

【摘要】目的研究核糖核苷酸还原酶亚单位M2(RRM2)基因在人胃癌MKN-45

细胞增殖、侵袭、耐药中的作用,并初步探讨其可能的机制.方法设计两组靶向

RRM2基因的小干扰RNA,分别转染胃癌细胞MKN-45以抑制RRM2基因的表达,

并同时设立阴性对照组(NC组)及未转染组.转染后琼脂糖电泳检测各组细胞RRM2

基因表达,Western-blot检测各组细胞RRM2蛋白表达.CCK-8法对各组细胞增殖

能力进行检测.不同浓度顺铂处理各组细胞进行耐药能力检测.采用Transwell小室

对各组细胞侵袭能力进行检测.结果琼脂糖电泳及Western-blot检测显示转染

RRM2-siRNA后,RRM2在基因水平及蛋白水平表达均明显下调.转染RRM2-

siRNA的人胃癌MKN-45细胞的增殖能力、侵袭能力均显著低于未转染组及NC

组(P0.05),转染组顺铂IC50分别为0.081μg/mL及0.079μg/mL,明显低于未转

染组(0.14μg/mL)及NC组(0.136μg/mL)(P0.01).结论RRM2基因具有促进胃癌

细胞增殖、侵袭的作用,并与顺铂耐药相关.

【期刊名称】《医学综述》

【年(卷),期】2018(024)013

【总页数】5页(P2684-2688)

【关键词】胃癌;核糖核苷酸还原酶亚单位M2;小干扰RNA

【作者】侯志斌;李菊英;苟笑丹

【作者单位】西宁市第二人民医院病理科,西宁810003;青海大学病理学教研室,西

宁810016;青海大学附属医院病理科,西宁810001

【正文语种】中文

【中图分类】R735.2

胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一。其发病率和病死率在世界范围内分别居第四和

第三位[1]。我国是全球胃癌高发地区，发病率和病死率均居第二位，每年约有50

万人死于胃癌[2]。核糖核苷酸还原酶亚单位M2(ribonucleotidereductaseM2，

RRM2)是核糖核苷酸还原酶的一个小亚基，与核糖核苷酸代谢密切相关且作为限

速酶对DNA合成与修复发挥调节作用[3]，在细胞分裂、增殖、分化、凋亡等生

物学行为中扮演重要角色。研究表明RRM2在胃癌、肝癌等多种肿瘤中高表达，

在肿瘤耐药性的形成、侵袭、转移、复发等过程中均发挥一定作用，且与肿瘤的分

期与预后相关[4-5]。小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)是20～25个核

苷酸构成的双链RNA，能诱导目的基因沉默而使目的基因生物学特性发生改变，

进而对目的基因功能进行研究，是目前分子生物学中应用极为广泛的研究方法。为

探讨RRM2基因在胃癌细胞增殖、侵袭、耐药中的作用，本研究通过siRNA抑制

胃癌细胞系MKN-45中RRM2基因表达，研究该基因与胃癌细胞增殖、侵袭及耐

药的关系，为后续相关机制研究奠定基础。

1材料与方法

1.1实验材料MKN-45胃癌细胞由青海大学基础医学实验中心惠赠。细胞计数试

剂盒-8(CellCountingKit-8，CCK8东仁，日本)；RRM2一抗(美国Abcam公

司)；甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate

dehydrogenase,GAPDH)一抗(美国Abcam公司)；RRM2二抗(美国Jackon公

司)；GAPDH二抗(美国Jackon公司)；顺铂(美国Hospira公司)；AurumTotal

RNAMiniKit(美国BIO-RAD公司)；iScriptcDNASynthesisKit(美国BIO-RAD

公司)；BCAkit(美国Thermo公司)；Transwellchamber(美国millpore公司)；

Martrigel(美国BD公