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中国免疫学杂志２００８年第２４卷

ＰＦＰ、ＧｒＢ真核共表达载体的构建及表达分析①

李秀英夏良平②赖延东③（暨南大学药学院基因组药物研究所，广州５１０６３２）

中国图书分类号ＱＢ１２文献标识码Ａ文章编号１０００－４８４Ｘ｛２００８）０６－０４９２－０４

［摘要］目的：体外扩增出ＰＦＰ、ＧｒＢ基因的全片段并构建共表达重组体ｐＶＡＸＩ．ＰＩＧ（即ｐＶＡＸＩ．ＰＦＰ－ＩＲＫＳ－ＧｒＢ），分析其在

人喉癌细胞Ｈｅｐ－２中的表达情况。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ的方法从人的喉癌组织浸润淋巴细胞中扩增全长ＰＦＰ、ＧｒＢ的ｃＤＮＡ片段

并构建共表达重组体ｐＶＡＸＩ．ＰＩＧ。利用脂质体ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＴＭ２０００将重组真核表达载体ｐＶＡＸＩ．ＰＩＧ转染人人的Ｈｅｐ－２细胞株

中，采用ＲＴ－ＰＣＲ、间接免疫荧光法分析其在人Ｈｅｐ－２中的表达情况。结果：经双酶切、测序法证实已成功扩增ＰＦＰ、ＧｒＢ基因的

全长ｃＤＮＡ，并构建共表达重组体０ＶＡＸ１．ＰＩＧ，在荧光显微镜下可见已转染ｐＶＡＸＩ．ＰＩＧ的人Ｈｅｐ－２细胞的胞浆发出苹果绿色荧

光。结论：成功扩增ＰＦＰ、ＧｒＢ全片段、构建共表达重组体ｐＶＡＸ１．ＰＩＧ，并在人Ｈｅｐ－２细胞中检测到ＰＦＰ、ＧｒＢ蛋白的表达，穿孔素

（ＰＦＰ）／颗粒酶Ｂ共同表达能够介导细胞的凋亡，为其在喉癌治疗中的应用研究奠定了基础。

［关键词］穿孔素；颗粒酶Ｂ；共表达；间接免疫荧光

Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ０ｆｃ０－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｏｆｐＶＡＸ１－ＰＩＧａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｇｒａｎｚｙｍｅＢ

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Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，脚Ｍ５１０６３２，Ｃｈｉｎａ

［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏａｍｐｌｉｆｙ矗】ＪＪ－ｌｅｎｇｔｈｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ￣ｑｓｌｅｎｃｅｏｆｈｕｍａｎｇｒａｎｚｙ￣ｅＢ（ＧｒＢ）ａｎｄｐｅｒｆｏｒｉｎ（ＰＦＰ）ｆｉｒｓｔｌｙ，ｔｈｅｎｔｏｅｏｎ－

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