HCV核心抗原检测(ELISA法) .pdfVIP

1.检验目的与原理

1.1检验目的

规范丙型肝炎病毒核心抗原检测试验，确保检测结果准确性和重复性。可用于临床辅助

诊断是否感染丙型肝炎病毒。

1.2检验原理

应用ELISA法原理检测人血清或血浆中的丙型肝炎病毒游离核心抗原，用2株丙型肝

炎病毒核心抗原的单克隆抗体包被酶标板，另2株丙型肝炎病毒核心抗原的单克隆抗体标记

辣根过氧化物酶，加入TMB显色液后显色，用来检测血清或血浆中的丙型肝炎病毒游离核

心抗原。

1.3分析参数

样品量100μL

试剂量100μL

方法ELISA

反应时间90分钟

反应温度37℃

2.样本收集和贮存

2.1原始样本系统

血清（包括SST管）和血浆（EDTA-K2、肝素锂、肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1、

CP2D、CPD、草酸钾），尿液（晨尿、随时尿、24小时尿等）或其它体液（羊水等）使用

玻璃管或塑料管分离样本，无黄疸、无溶血、无脂血，已分离出的样本应立即分析。

2.2试管及填充物类型

血清样本需用标准试管或有分离胶的真空管，收集3ml血液。待血液凝固后3500rpm

离心5分钟，分离血清。

2.3保存条件及时间

2.3.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。离心必须达到

3000rpm15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。

2.3.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2-8℃）稳定5d，在-20℃

最多可保存4周。避免反复冻融。不可使用热灭活的标本。

2.3.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。

3.试剂

3.1试剂成分

丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂盒（酶联免疫法），湖南康润药业有限公司，国药准字

3401179。

试剂盒组分：1.抗HCV-cAg单克隆抗体包被酶标板；

2.抗HCV-cAg酶标记抗体工作液；

3.HCV-cAg阳性对照；

4.HCV-cAg阴性对照；

5.浓缩洗涤液；

6.TMB显色液A；

7.TMB显色液B；

8.终止液；

9.附件：自封袋、封板模和产品说明书。

3.2试剂准备

试验前提前将所需的试剂盒从贮藏冰箱领出，室温平衡30分钟。

3.3试剂贮藏要求（StorageInstruction）

未打开的试剂盒保存于2-8℃，效期12个月。不可冻存。

4.仪器

TECAN酶免工作站。

5.校准

见TECAN酶免工作站SOP。

6.操作步骤

6.1配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

6.2加样：将微孔条固定于支架，按序编号。每次检测均需设置阴性对照、阳

性对照和空白对照各2孔。空白对照孔直接加入样品稀释液200微升，其

余每孔加样品稀释液100微升，分别在相应孔加入待测样品、阴性对照和

阳性对照各100ul。

6.3温育：充分混匀，封板，置37°C孵育60分钟。

6.4洗板：小心揭掉封板模，用洗涤液洗涤5遍，最后一次尽量扣干。

6.5加酶：每孔加入酶结合物200ul。

6.7温育：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。

6.8洗涤：小心揭掉封板模，用洗涤液洗涤5遍，最后一次尽量扣干。

6.9显色：每孔加入显色剂A、B各50l，轻轻振荡混匀，37℃避光显色10

分钟。

6.10测定：每孔加终止液50l，轻轻振