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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号CN101590225A
(43)申请公布日2009.12.02
(21)申请号CN200910067156.0
(22)申请日2009.06.19
(71)申请人长春长生生物科技股份有限公司
地址130011吉林省长春市高新区越达路1615号
(72)发明人孙惠军牟盈盈梁艳婷李冲巨爽杨宗辉
(74)专利代理机构吉林长春新纪元专利代理有限责任公司
代理人陈宏伟
(51)Int.CI
A61K39/116
A61K39/05
A61K39/10
A61K39/08
A61K39/095
A61K39/102
A61P31/04
权利要求说明书说明书幅图
(54)发明名称
百白破、A+C群脑膜炎球菌－b型
流感嗜血杆菌结合疫苗
(57)摘要
本发明提供一种百白破、A+C群脑
膜炎球菌－b型流感嗜血杆菌结合疫苗，
采用A、C群脑膜炎奈瑟氏双球菌、b型流
感嗜血杆菌培养液，分别提取荚膜多糖，
经过纯化、活化后，与破伤风类毒素结
合，然后将A、C群脑膜炎多糖结合疫苗
原液、b型流感嗜血杆菌结合疫苗原液与
无细胞百白破原液按一定比例混合，获得
一针多种免疫的效果。
法律状态
法律状态公告日法律状态信息法律状态
权利要求说明书
1、一种百白破、A+C群脑膜炎球菌-b型流感嗜血杆菌结合疫苗，每支成品含以下
组分及含量：
A群脑膜炎球菌多糖：10μg
C群脑膜炎球菌多糖：10μg
b型流感嗜血杆菌多糖：10μg
乳糖：～3.0mg2.5
无细胞百日咳原液：18μgPN/ml
白喉类毒素：25Lf/ml
破伤风类毒素：7Lf/ml
氢氧化铝含量：～1.5mg/ml1.0。
2、权利要求1所述联合疫苗的制备工艺，包括以下步骤：
1)菌种的的选用：选用A、C群脑膜炎奈瑟氏球菌，b型流感嗜血杆菌菌种，用于
A、C群脑膜炎球菌-b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备；
2)生产用种子
启开工作种子批菌种，经适当传代，经检定合格后，接种改良半综合培养基或其他
适宜培养基，制备数量适宜的生产用种子；
3)生产用培养基
采用改良半综合培养基或经批准的其他适宜培养基。培养基不应含有与十六烷基三
甲基溴化铵形成沉淀的成分；
4)培养
采用培养罐液体培养。在培养过程中取样进行纯菌检查，涂片做革兰氏染色镜检，
如发现污染杂菌，应废弃；
5)收获和杀菌
于对数生长期的后期或静止期的前期终止培养。取样进行菌液浓度测定及纯菌检查，
合格后在收获的培养液中加入甲醛溶液杀菌，或采用加热方法杀菌，以确保杀菌安
全又不损伤其多糖抗原为宜；
6)去核酸
将已杀菌的培养液(单批或多批混合)离心后收集上清液，加入十六烷基三甲基溴化
铵，充分混匀，形成沉淀；离心后的沉淀物加入适量氯化钙溶液，其最终浓度为
1mol/L，使多糖十六烷基三甲基溴化铵解离，加入乙醇至最终浓度为25％，2-8℃
静置1-3小时或过夜，离心收集澄清的上清液；
7)沉淀多糖
于上述上清液中加入冷却乙醇至最终浓度为80％，充分振摇，离心收集沉淀，用
无水乙醇及丙酮各洗2次以上，将沉淀物即为多糖粗制品，应保存在-20℃以下，
待纯化；
8)多糖纯化
将粗制品溶解于1/10饱和中性醋酸钠溶液中，使其浓度达10-20mg/ml；按1∶2容
量用冷酚(100g结晶酚溶于40
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