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传染性法氏囊病病毒HB株VP2蛋白的表达及免疫原性测定

杜冬华;周静;王爱华;王磊;孙继国

【摘要】为了研究传染性法氏囊病病毒河北分离株(HB株)VP2蛋白的免疫原性,对

VP2基因进行了表达及免疫原性测定.将传染性法氏囊病病毒HB株VP2基因亚克

隆到原核表达载体pET-32a-c(+)中并对其进行了诱导表达.SDS电泳和

Westernblot分析表明,表达的重组蛋白约55ku,以包涵体形式存在.重组蛋白纯

化后,免疫接种6周龄Balb/c小鼠,制备的血清ELISA效价在1∶6400以上,说明

所表达的HB株VP2蛋白免疫原性良好.

【期刊名称】《动物医学进展》

【年(卷),期】2013(034)002

【总页数】4页(P71-74)

【关键词】传染性法氏囊病病毒;HB株;VP2蛋白;克隆表达;免疫原性

【作者】杜冬华;周静;王爱华;王磊;孙继国

【作者单位】河北北方学院动物科技学院动物医学系,河北张家口075131;河北北

方学院动物科技学院动物医学系,河北张家口075131;河北北方学院动物科技学院

动物医学系,河北张家口075131;农标普瑞纳饲料有限公司,河北廊坊065000;河北

农业大学,河北保定071000

【正文语种】中文

【中图分类】S852.659.4

传染性法氏囊病（Infectiousbursaldisease，IBD）是由传染性法氏囊病病毒

（Infectiousbursaldiseasevirus，IBDV）引起的严重影响养禽业发展的重要传

染病之一，病原属双RNA病毒科成员［1-3］。从IBDV发现至今，新的变异株

及超强毒株不断出现，使得传统活疫苗和灭活疫苗已无法完全阻止IBD的发生和

流行［4］，迫切需要开发更加安全、有效的新型疫苗，而且基因工程疫苗是未来

发展方向［5］。目前，已知该病毒基因组共编码VP1、VP2、VP3、VP4和VP5

5种蛋白，其中VP2蛋白是宿主保护性免疫原，可诱导产生中和抗体，已成为近

年来众多学者研究的热点［6-7］。本试验利用大肠埃希菌表达系统，表达出

IBDVHB株VP2蛋白，探索其用于免疫预防的可行性。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1病毒及抗体IBDVHB株由河北农业大学动物卫检实验室分离鉴定并保存，

经生物学测定及VP2基因序列分析为中等毒力毒株，且经验证将其作为活疫苗接

种雏鸡效果良好；鼠抗IBDVHB株阳性血清由河北北方学院动物传染病实验室制

备；羊抗鼠HRP标记二抗购自天根生化科技（北京）有限公司。

1.1.2重组质粒含有VP2完整基因序列的重组质粒pBS-VP2由河北农业大学动物

卫检实验室构建，目的基因全长1542bp，并分别在上、下游引物引入EcoRⅠ和

HindⅢ酶切位点。

1.2方法

1.2.1目的基因原核表达载体的构建将含VP2基因的重组质粒pBS-VP2用

EcoRⅠ和HindⅢ双酶切，胶回收目的片段；原核表达载体pET-32a-c（＋）做同

样的酶切回收处理；二者连接后转化大肠埃希菌TOP10感受态细胞，重组质粒用

EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定，阳性重组表达质粒命名为pET-VP2。

1.2.2VP2基因的表达重组质粒pET-VP2转化表达菌株BL21（DE3），接入

含有Amp（200μg／mL）的LB培养基，37℃振荡培养至OD600nm到0.6，

加入IPTG至终浓度1mmol／L，继续培养3h。表达蛋白参考文献［8］方法，用

75g／L的SDS、Westernblot检测。

1.2.3重组蛋白的大量表达挑取重组菌单菌落接种于10mL含Amp的LB培养基

中，37℃振荡培养过夜，接入2000mL含Amp的LB液体培养基，按上述方法

诱导表达。参考文献［8］，测定蛋白溶解性，纯化表达蛋白。

1.2.4表达重组蛋白的动物免疫表达的重组蛋白进行SDS电泳后，凝胶在

预冷的0.25mol／LKCl溶液浸泡2min，显示蛋白条带后，将目的蛋白条带切下

纯化回收。将纯化的VP2蛋白与等体积