病毒感染力的滴定.ppt

关于病毒感染力的滴定半数致死量LD50（50%lethaldose）半数感染量ID50(50%infectivedose)半数鸡胚致死量ELD50(egg50%lethaldose)半数鸡胚感染量EID50(egg50%infectivedose)半数细胞培养物感染量TCID50（tissueculture50%infectivedose)蚀斑形成单位（plaqueformingunit，PFU）测定病毒感染力的方法:第2页,共26页，星期六，2024年，5月将病毒作一定梯度的连续稀释后接种于实验动物或鸡胚或培养细胞，每一稀释度作多个重复，在一定时间内，记录动物（鸡胚）发病或死亡的数量或细胞病变的情况，利用Reed-Muench法或Karber法计算病毒的感染力。测定病毒感染力的基本过程:第3页,共26页，星期六，2024年，5月一、病毒TCID50的测定操作步骤在青霉素瓶中将病毒作连续10倍的稀释，从10-1-10-10。将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度作8孔，每孔接种100μl。在每孔加入细胞悬液100μl，使细胞量达到3×105个/ml。第4页,共26页，星期六，2024年，5月设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。结果的计算，按Reed-Muench两氏法或Karber法第5页,共26页，星期六，2024年，5月10-110-210-310-410-510-610-710-8TCID50的计算方法（CalculationofTCID50）第6页,共26页，星期六，2024年，5月病毒液出现无CPE累计出现CPE孔稀释度CPE孔数孔数CPE孔数无CPE孔数所占的%10-180510100（51/51）10-280430100（43/43）10-380350100（35/35）10-480270100（27/27）10-580190100（19/19）10-67111191.7（11/12）10-7354640（4/10）10-8171137.1（1/14）?1、Reed-Muench法CPE：Cytopathiceffect第7页,共26页，星期六，2024年，5月距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数）＝（91.7-50）/（91.7-40）＝0.8第8页,共26页，星期六，2024年，5月lgTCID50=距离此例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数=0.8×(-1)+(-6)=-6.8TCID50=10-6.8／0.1ml含义：将该病毒稀释106.8倍接种96孔细胞培养板，每孔100μl，可使50%接种孔的细胞发生病变。第9页,共26页，星期六，2024年，5月2、Karber法病毒液稀释度出现CPE的孔数出现