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大鼠胶质细胞源性神经营养因子克隆及表达的研究

的开题报告

一、课题背景及研究意义

神经营养因子（neurotrophicfactors，NTFs）是一类在中枢神经系

统和周围神经系统中具有重要作用的生物分子。它们能够促进神经元的

生长、分化和存活，并且参与神经细胞和胶质细胞的相互作用。由于其

在神经系统正常发育中的关键作用，NTFs被广泛应用于神经系统疾病的

治疗研究中。

胶质细胞源性神经营养因子（glial-cellderivedneurotrophicfactor，

GDNF）是一种高度保守的多肽分子。它最初是从大鼠胶质细胞中分离出

来的，并被发现对于多巴胺能神经元具有特异性的保护作用。GDNF不仅

能够促进神经元的存活和生长，还能够提高神经元的代谢和功能状态，

因此在治疗神经系统疾病（如帕金森症、骨髓炎等）中具有广泛的应用

前景。本研究将对大鼠胶质细胞源性神经营养因子的克隆及表达进行研

究，为开发治疗神经系统疾病的药物提供理论基础。

二、研究内容和方法

1.基因克隆

本研究将采用反向转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，设计GDNF

基因的引物，从大鼠胶质细胞中PCR扩增GDNF的全长序列。

2.载体构建

将PCR扩增的GDNF基因克隆至pET28a载体中，利用限制酶切和

连接技术将GDNF基因与pET28a载体连接。

3.蛋白表达

将重组质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，通过异丙基-β-D-硫代

半乳糖苷（IPTG）诱导表达GDNF蛋白。

4.蛋白纯化

通过亲和层析技术（如镍离子柱层析、抗His抗体柱层析等），纯

化得到重组GDNF蛋白。

5.蛋白鉴定

利用SDS和Westernblotting技术对纯化的GDNF蛋白进行鉴

定和鉴定。通过蛋白质质谱鉴定得到纯化的GDNF蛋白的质量。

三、预期成果和意义

本研究将成功克隆得到大鼠胶质细胞源性神经营养因子，并实现其

在大肠杆菌中的表达和纯化。通过对GDNF蛋白的鉴定和分析，可为后

续的药物开发提供基础数据。本研究对于神经科学领域对GDNF的作用、

机制及成分等的研究具有重要的理论和实际意义。