紫外-可见分光光度法 中国药品检验标准操作规范 2010年版 .pdfVIP

紫外-可见分光光度法

1简述

紫外-可见分光光度法是通过被测物质在紫外光区或可见光区的

特定波长处或一定波长范围内的吸光度，对该物质进行定性和定量分

析的方法。本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。

定量分析通常选择物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后用对

照品或吸收系数求算出被测物质的含量，多用于制剂的含量测定；对

已知物质定性可用吸收峰波长或吸光度比值作为鉴别方法；若该物质

本身在紫外光区无吸收，而其杂质在紫外光区有相当强度的吸收，或

杂质的吸收峰处该物质无吸收，则可用本法作杂质检查。

物质对紫外辐射的吸收是由于分子中原子的外层电子跃迁所产

生，因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱又称电

子光谱。有机化合物分子结构中如含有共轭体系、芳香环等发色基团，

均可在紫外区（200~400nm）或可见光区（400~850nm）产生吸收。

通常使用的紫外-可见分光光度计的工作波长范围为190~900nm。

紫外吸收光谱为物质对紫外区辐射的能量吸收图。朗伯-比尔

（Lambert-Beer）定律为光的吸收定律，它是紫外分光光度法定量分

析的依据，其数学表达式为：

1

A=lg=Ecl

T

式中A为吸光度；

T为透光率；

E为吸收系数；

c为溶液浓度；

l为光路长度。

如溶液的浓度（c）为1%（g/ml），光路长度（l）为1cm，相应

1%

的吸光度即为吸收系数，以E表示。如溶液的浓度（c）为摩尔浓度

1cm

（mol/L），光路长度为1cm时，则相应的吸收系数为摩尔吸收系数，

以ε表示。

2仪器

紫外-可见分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、

记录仪、显示系统和数据处理系统等部分组成。

为了满足紫外-可见光区全波长范围的测定，仪器备有两种光源，

即氘灯和碘钨灯，前者用于紫外区，后者用于可见光区。

单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件，聚

焦透镜或反射镜等组成。色散元件有棱镜和光栅两种，棱镜多用于天

然石英或熔融硅石制成，对200～400nm波长光的色散能力很强，对

600nm以上波长的光色散能力较差，棱镜色散所得的光谱为非匀排光

谱。光栅系将反射或投射光经衍射而达到色散的作用，故常称为衍射

光栅，光栅光谱是按波长作线性排列，故为匀排光谱，双光束仪器多

用光栅为色散元件。

检测器有光电管和光电倍增管两种。

紫外-可见分光光度计依据其结构和测量操作方式的不同可分为

单光束和双光束分光光度计两种。单光束分光光度计有些仍为手工操

作，即固定在某一波长，分别测量比较空白、样品或参比的透光率或

吸光度，操作比较费时，用于绘制吸收光谱图时很不方便，但适用于

单波长的含量测定。双光束分光光度计藉扇形镜交替切换光路使分成

样品（S）和参比（R）两光束，并先后到达检测器，检测器信号经调

制分离成两光路对应新号，新号的比值可直接用记录仪记录，双光束

分光光度计操作简单，测量快速，自动化程度高，但作含量测定时，

为求准确起见，仍宜用固定波长的测量方式。

3紫外-可见分光光度计的检定

3.1波长准确度

3.1.1波长准确度的允差范围紫外-可见分光光度计波长准确度允

许误差，紫外区为±1nm，500nm处±2nm。

3.1.2波长准确度检定方法

3.1.2.1用低压汞灯检定关闭仪器光源，将汞灯（用笔式汞灯最方

便）直接对准进光狭缝，如为双光束仪器，用单光束能量测定方式，

采用波长扫描方式，扫描速度“慢”（如15nm/min）、响应“快”、最

小狭缝宽度（如0.1nm）、量程0～100%，在200～800nm范围内单方

向重复扫描3次，由仪器识别记录各峰值（若仪器无“峰检测”功能，

必要时可对指定波长进行“单峰”扫描）。

用于检定紫外-可见分光光度计的汞灯谱线波长：237.83、253.65、

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