VTA Orexin-A通路对大鼠胃牵张敏感神经元放电活动和胃功能的调控研究.pdfVIP

LHA-VTAOrexin-A通路对大鼠胃牵张敏感神经元放电活动

和胃功能的调控研究

宗勇;刘潇柠;金婷婷;孙向荣;栾晓;高胜利;郭菲菲

【期刊名称】《《中外医学研究》》

【年(卷),期】2019(017)026

【总页数】4页(P3-6)

【关键词】Orexin-A;下丘脑外侧核-中脑腹侧被盖区通路;胃牵张敏感神经元;胃

排空

【作者】宗勇;刘潇柠;金婷婷;孙向荣;栾晓;高胜利;郭菲菲

【作者单位】青岛大学基础医学院山东青岛266071;淄博市临淄区妇幼保健院

【正文语种】中文

下丘脑包含室旁核(PVN)、弓状核(ARC)、腹内侧核(VMH)、背内侧核(DMH)和外

侧区(LHA)等，主要通过协调行为、代谢和神经内分泌反应等发挥作用[1]。下丘脑

LHA因损伤后动物模型出现摄食量下降和致死性的昏睡，一直被认为是“饥饿中

枢”和重要的觉醒核团，且是中枢少数几个表达神经肽Orexin的核团之一[2-3]。

Orexin主要作用是促进摄食和维持觉醒状态，包括Orexin-A和Orexin-B两种

亚型，其受体为Orexin1型和2型，在中枢广泛分布，Orexin神经元轴突在整

个大脑中广泛投射，有广泛而复杂的功能[4-5]。

VTA是中脑边缘多巴胺系统的核心脑区，在成瘾药物，如吗啡作用下，VTA内多

巴胺(DA)神经元被激活，使伏隔核(NAc)内DA水平显著升高，这是成瘾药物发挥

奖赏和强化效应及成瘾行为建立的重要神经基础[6]。进一步动物实验发现，VTA、

NAc和LC等成瘾和奖赏行为反应有关核团内存在Orexin神经投射纤维[7]，且

VTA注射Orexin激活VTA多巴胺能神经元，增强由食物或药物引发的奖赏行为

[8-10]。

本研究应用神经元单细胞外放电方法记录电刺激LHA对VTA神经元放电频率，

通过胃排空变化观察VTA在Orexin调控摄食中的作用，从而能够对LHA表达

Orexin作用和VTA在摄食、代谢和奖赏成瘾间相互调控作用有进一步认识，为肥

胖和成瘾治疗提供理论基础。

1材料与方法

1.1实验动物与分组

Sprague-Dawley(SD)健康大鼠，成年雄性，体重200～250g，标准饲料，饮水

进食无限制。动物实验前适应性饲养1周。按照《青岛大学实验动物保护和使用

管理办法》要求进行所有动物实验。细胞外放电记录共用大鼠90只，其中VTA

注射Orexin-A后用50只，电刺激LHA后用40只。大鼠胃排空共用48只，其

中VTA注射Orexin-A后用24只，随机分为三组(n=8)：生理盐水组、Orexin-A

组、SB334867+Orexin-A组；电刺激LHA后用24只，随机分为三组(n=8)：假

电刺激组(SS)、电刺激组(ES)、SB334867+ES组。

1.2实验方法

1.2.1动物麻醉大鼠禁食18h后，腹腔注射水合氯醛麻醉(10%，300mg/kg)。

实验过程中根据动物反应程度酌情注射水合氯醛维持麻醉状态，每次低于首剂量的

1/3。

1.2.2胃部手术分离大鼠胃部，胃大弯侧切开胃腔，长约1cm，开口处放入胃扩

张球囊，球囊接聚乙烯软管到电子恒压器，缝合胃部切口。再结扎胃幽门与十二指

肠结合部，避免十二指肠反流。最后缝合腹部切口。为模拟胃部摄食扩张，由电子

恒压器注射3～5ml生理盐水进入胃内球囊，持续20s，间隔4min，共2h[11]。

1.2.3VTA埋管术空腹大鼠麻醉后固定于恒温脑立体定位仪。参照Paxinos大鼠

脑解剖图谱[12]，按VTA(前囟后5.6～6mm，正中线旁开0.5～1mm，颅骨下

8～9mm)定位用牙科钻在颅骨开口，将不锈钢套管(29G)缓慢插入VTA，用牙托

粉固定，缝合头皮。术后7d，每日腹腔注射青霉素8万单位。

1.2.4玻璃微电极制备按要求(尖端直径约3～10μm，电极阻抗5～20MΩ)制备

四管玻璃微电极[13]，1号管灌注0.2%滂胺天蓝(pH7.7)，滂胺天蓝内插入银电

极丝，传导电流信号至电生理记录仪；2、3和4号管分别用于注射Orexin-A溶

液、SB-334867溶液或0.5mol/L氯化