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人B7h基因原核表达载体的构建和表达的开题报告
1.研究背景和意义
基因表达载体是生物技术领域中重要的工具，可以用于基因转染、基因治疗和基因编
辑等研究方向。B7-H家族成员是一类共刺激分子，在肿瘤免疫疗法和移植免疫方面有
重要作用。当前，研究B7-H分子的功能和调控机制已成为免疫治疗领域的热点问题之
一。在此背景下，构建一个高效的原核表达载体是必要的。
2.研究内容和方法
（1）选择适合的重组质粒载体。在构建原核表达载体时，选择适合的质粒非常重要。
根据目的和实验条件，选择pET系列、pGEX系列或者pMAL系列等重组质粒，同时
还要考虑表达宿主菌株和打靶蛋白的产量等因素。
（2）选取适合的宿主菌株。在原核表达中，一般选择大肠杆菌作为宿主菌株，因为其
易于培养和大量生产。在菌株选取中，还要注意质粒的拷贝数、菌株生长速度和表达
产物的稳定性。
（3）扩增目的基因。获取目的基因需要进行PCR扩增。在PCR反应中，应根据目的
基因的大小、GC含量等因素，合理设置反应体系，同时需要对PCR产物进行分离纯化。
（4）将目的基因克隆到载体中。构建目的载体需要进行双酶切和连接，通过T4DNA
连接酶、限制酶和琼脂糖凝胶电泳等技术进行原核表达载体的构建。
（5）转染表达宿主菌株。将构建好的重组质粒转染大肠杆菌中，并通过平板筛选、
PCR等方法鉴定获得含有目的基因的表达宿主菌株。
（6）表达和纯化目的蛋白。在菌株表达达到最优条件时，通过感光性吸附树脂、金属
离子亲和树脂、凝胶过滤等不同的分离纯化方法获得目的蛋白。
3.预期结果
通过以上研究内容和方法，预期可以成功构建出一个高效的原核表达载体，实现目的
基因在大肠杆菌中的表达。同时，可以获得表达产物，通过不同的纯化方法获得目的
蛋白，为后续的功能研究提供基础支持。
4.参考文献
1.HuangR,etal.B7-H3andB7-H4expressioninnon-small-celllungcancer.Lung
cancer,2009.
2.HuangR,etal.B7-H4overexpressionpotentiatesimmuneevasionofcancercells.
Cancerbiomedicine,2014.
3.Kretz-RommelA,etal.B7-H3andB7-H4expressioninglioblastomas:correlation
withtumorproliferationandpatientsurvival.ClinicalCancerResearch,2004.
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