信号通路对再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞的调控机制研究.pdfVIP

VEGF与Notch信号通路对再生障碍性贫血患者骨髓间充质

干细胞的调控机制研究

邓姝;项静静;胡致平;沈建平;曾宇晴

【摘要】目的观察血管内皮生长因子(VEGF)通过Notch信号通路对再生障碍性

贫血(AA)患者骨髓造血微环境的影响,探讨VEGF与Notch信号通路对骨髓间充质

干细胞(MSC)的调控机制.方法选取AA患者与健康志愿者的骨髓MSC,VEGF干预

后分别采用CCK-8法、流式细胞仪检测MSC细胞增殖、分化情况,分别采用

Westernblot、qRT-PCR法检测MSCVEGF与Notch信号通路相关蛋白、基因

表达情况,采用免疫荧光法检测MSC内皮分化能力.结果CCK-8法检测显示,VEGF

的干预可明显上调AA患者MSC的增殖能力.流式细胞仪检测显示,VEGF通过阻断

S期细胞促进AA患者MSC的增殖,抑制其凋亡.Westernblot、qRT-PCR法检测

显示,AA患者MSCVEGF与Notch信号通路相关蛋白、基因表达受抑制,VEGF的

干预可促进MSC的Notch信号通路传导.免疫荧光法检测提示,AA患者MSC肉

皮分化能力弱于正常MSC.结论VEGF或可通过Notch信号通路调控AA患者

MSC,从而改善骨髓造血微环境.

【期刊名称】《浙江医学》

【年(卷),期】2018(040)024

【总页数】6页(P2628-2632,2646)

【关键词】再生障碍性贫血;血管内皮生长因子;Notch;骨髓间充质干细胞

【作者】邓姝;项静静;胡致平;沈建平;曾宇晴

【作者单位】310006杭州,浙江中医药大学附属第一医院血液科;310006杭州,浙

江中医药大学附属第一医院血液科;310006杭州,浙江中医药大学附属第一医院血

液科;310006杭州,浙江中医药大学附属第一医院血液科;浙江省立同德医院骨科

【正文语种】中文

再生障碍性贫血（aplasticanemia，AA）是一种由多种病因引起的骨髓造血功能

衰竭、全血细胞减少性疾病，临床常表现为贫血、出血及感染，病死率高。骨髓造

血微环境的改变参与了AA的病理生理过程，并与造血衰竭程度[1]及治疗反应有

关。骨髓中新生血管形成是造血微环境的重要一环。研究发现，血管内皮生长因子

（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）可直接作用于内皮细胞，参与新

生血管形成；Notch信号通路通过影响局部细胞间的相互作用也对血管的形成产

生重要影响。但VEGF如何影响AA患者骨髓造血微环境的作用机制尚未完全阐明。

因此，本研究旨在观察VEGF通过Notch信号通路对AA患者骨髓造血微环境的

影响，探讨VEGF与Notch信号通路对骨髓间充质干细胞（mesenchymalstem

cell，MSC）的调控机制，现报道如下。

1对象和方法

1.1对象选取2016年7月至2017年2月浙江中医药大学附属第一医院收治的

AA患者10例。其中男4例，女6例；年龄15~46岁，中位年龄26.5岁。同时

招募健康骨髓造血干细胞捐献志愿者5例。本研究经浙江中医药大学附属第一医

院医学伦理委员会批准，患者或家属及志愿者知情同意并签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1MSC的分离、培养、传代及鉴定留取AA患者与健康志愿者的骨髓标本各

5ml。骨髓标本与DMEM（美国Hyclone公司）1：1混匀添加到淋巴细胞分离

培养基上（美国Sigma公司），并通过离心机（上海贝恩生物科技有限公司）分

离。将骨髓单个核细胞重悬于DMEM培养基中，并以1×105/ml的密度接种于培

养瓶中。在37℃、5%二氧化碳条件下培养48h后更换培养基。每3~4d换液1

次，约2周后完成原代培养，并依次记为P2、P3代细胞。取P3代细胞应用流式

细胞仪（美国BD公司）检测细胞免疫表