人免疫缺陷病毒_型Vif蛋白的原核表达_纯化及单克隆抗体制备_隋洪帅.pdfVIP

生物技术通讯

LETTERSINBIOTECHNOLOGYVol．20No．4July,2009475

doi:10．3969／j．issn．1009－0002．2009．04．006研究报告

人免疫缺陷病毒Ⅰ型Vif蛋白的原核表达、纯化及单克隆抗体制备

隋洪帅，郭东星，刘思扬，鲍作义，刘永健，庄道民，李韩平，李敬云，李林

军事医学科学院微生物流行病研究所，全军艾滋病检测中心，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071

ⅠHIV－1VifHIV

［摘要］目的：克隆、表达、纯化人免疫缺陷病毒型（）蛋白，制备其单克隆抗体。方法：提取感染了的细胞基

DNAPCRvifpET32aBL21DE3IPTGWestern

因组，扩增基因，插入表达载体，转化大肠杆菌（）获得工程菌株，诱导蛋白表达，

印迹鉴定目的蛋白，亲和层析纯化目的蛋白；免疫BALB／c小鼠，制备单克隆抗体。结果：构建了Vif蛋白的原核表达载体

vif－pET32aVif0．56

，并在大肠杆菌中获得高表达，目的蛋白以包涵体形式存在；纯化获得高纯度的重组蛋白，蛋白浓度可达

mg／mLVif1∶16×10

；建立了抗蛋白单克隆抗体细胞株，制备了腹水，滴度可达6，抗体纯化后保持了活性和特异性。结论：在原

核表达系统中表达、纯化了重组Vif蛋白，制备了针对Vif蛋白的单克隆抗体，为研究Vif蛋白的功能和抗原性奠定了基础。

ⅠVif

［关键词］人免疫缺陷病毒型；蛋白；原核表达；单克隆抗体

［中图分类号］Q78［文献标识码］A［文章编号］1009－0002(2009)04－0475－04

ProkaryoticExpression,PurificationofRegulatoryProteinVifofHIV－1andPrepa-

rationofMonoclonalAntibodyofVifProtein

SUIHong－Shuai,GUODong－Xing,LIUSi－Yang,BAOZuo－Yi,

LIUYong－Jian,ZHUANGDao－Min,LIHan－Ping,LIJing－Yun,LILin

PLACenterforHIVTest,StateKeyLaboratoryofPathogenandBiosecurity,BeijingInstituteofMicrobiologyandEpi-

demiology,Beijing100071,China

AbstractObjective:Toprokaryoticexpress,purifytheregulatoryproteinVifofHIV－1andpreparemonoclonalanti-

［］

bodyagainstVif．Methods:vifgeneofH