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GUS报告基因定量检测试剂盒使用说明书
产品编号：SL7161
产品储存：-20℃保存，有效期18个月。
产品组成：
产品组成SL7161-50TSL7161-100T
提取液50mL100mL
4-MU（1mM）1mL1mL×2
4-MUG底物液10mL10mL×2
终止液100mL×2100mL×4
说明书1份
产品说明：
GUS能与4-MUG反应产生荧光物质4-MU。4-MU的激发波长为365nm，发射波长为456nm。其含
量可由荧光分光光度计（或荧光酶标仪）测出。因此，我们可以根据单位质量的植物总蛋白在单位时间内
产生的荧光物质的多少来定量地检测GUS的含量。
荧光分光光度计测定的是相对值，因此用荧光分光光度计测定时必须用标准物4-MU进行校准。
使用方法：
一、植物总蛋白提取
1.取新鲜的植物组织100mg左右，用液氮将材料急速冷冻，然后采用液氮研磨的方式在研钵里磨碎组织。
如果无法立即研磨，可以先将液氮冷冻处理的植物组织储存于-80℃冰箱。
2.将研磨破碎的组织转到EP管里，并立即加入1mL的提取液，充分混匀。
3.12,000rpm，4℃离心10min。
4.将上清转至另一洁净的EP管，12,000rpm，4℃离心10min。
5.所得上清即为蛋白提取物，可以置于冰上待用，或者-80℃保存。
二、蛋白浓度的测定（Bradford法）
参照本公司产品Bradford蛋白浓度测定试剂盒（SK1060）使用说明书。
三、4-MU标准曲线绘制
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用终止液稀释4-MU，建议稀释至浓度1-10μM，即为标准液（避光放置），用于标准曲线绘制。
加样顺序标样编号
标记编号123456
4-MU（1mM）1μL2μL4μL6μL8μL10μL
终止液加入量999μL998μL996μL994μL992μL990μL
4-MU终浓度1μM2μM4μM6μM8μM10μM
四、GUS表达水平的定量测定
1.在3个1mL的离心管中分别加入900μL的终止液，置于37℃温浴。
2.取150μL蛋白提取物，加入150μL4-MUG底物液，37℃温浴，即为反应液。
3.分别在10min，20min，30min时，从上述反应体系中，取100μL加入步骤1中温浴的900μL终止液
中，避光放置直至测量结束。
4.三次荧光值测定后，形成一个酶促反应的速率折线，选择斜率较大的时间段作为最终的计算数值。
计算举例：假设荧光值M1（T110min）20，M2（T120min）40，M3（T330min）50，即选择M1
和M2作为最终的计算数值。
5.计算GUS的活性MU/min
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