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沙利度胺对A549细胞体外增殖的影响及其作用机制

徐小峰;徐玲;陈文萍;夏春伟

【摘要】目的探讨沙利度胺对人非小细胞肺癌细胞株A549体外增殖和其对

A549细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达的影

响.方法体外培养A549细胞株,分为对照组和沙利度胺组,后者分别加入不同质量浓

度(5,10,20,40,60mg/L)的沙利度胺体外培养24h.采用MTT法检测对A549细胞

增殖的抑制率,采用RT-PCR和Western-blot方法分别检测各组VEGF和VEGF-

CmRNA和蛋白水平的表达.结果沙利度胺体外能抑制A549细胞增殖,呈浓度依

赖性(P＜0.05).不同浓度沙利度胺作用于A549细胞后,VEGF和VEGF-CmRNA和

蛋白水平的表达均降低(P＜0.05).结论沙利度胺体外能抑制A549细胞的增殖,呈

浓度依赖性,其作用机制可能与沙利度胺下调VEGF及VEGF-C的表达有关.

【期刊名称】《中国生化药物杂志》

【年(卷),期】2010(031)006

【总页数】4页(P385-387,391)

【关键词】沙利度胺;非小细胞肺癌;A549;VEGF;VEGF-C

【作者】徐小峰;徐玲;陈文萍;夏春伟

【作者单位】南京市胸科医院,呼吸科,江苏,南京,210029;南京市胸科医院,呼吸科,

江苏,南京,210029;南京市胸科医院,呼吸科,江苏,南京,210029;南京市胸科医院,呼

吸科,江苏,南京,210029

【正文语种】中文

【中图分类】R962

肺癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一,发病率及死亡率在我国均呈上升趋势,预

计到2025年,我国肺癌患者将达到100万,成为世界第一肺癌大国[1]。非小细胞肺

癌(Nonsmall-celllungcancer,NSCLC)约占全部肺癌的85%,多数患者在确诊时

已出现转移,失去了根治性手术的机会。研究发现,肿瘤的生长和转移依赖血管和淋

巴管的生成,血管内皮生长因子(VEGF)是刺激恶性肿瘤血管形成的重要生长因子;血

管内皮生成因子C(VEGF-C)可以通过选择性的淋巴管生成,促进淋巴结转移播散[2]。

近年来体内外实验发现,沙利度胺(反应停,Thalidomide)具有免疫调节和抗血管生

成作用,目前临床已用于治疗浆细胞肿瘤,对某些实体瘤如肾癌、前列腺癌等也有一

定疗效,但其作用机制尚无定论。本研究旨在观察沙利度胺对NSCLC细胞株A549

体外增殖及VEGF和VEGF-C表达的影响,探讨沙利度胺抗肿瘤作用的可能机制及

其用于治疗NSCLC的可行性。

1材料

沙利度胺,Sigma公司;Trizol液及MMLV逆转录酶,日本TOYOBA公司;PCR

MasterMix试剂盒,美国Promega公司;鼠抗人VEGF和VEGF-C多克隆抗体,晶

美生物公司;BCIP/NBT显色试剂盒、RAPA蛋白裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂

盒,碧云天生物技术研究所。引物由上海生工生物技术服务有限公司合成。

A549细胞由中国医学科学院肿瘤所分子生物学检测中心提供。

MCO-15ACCO2恒温培养箱,日本SANYO;酶标仪、DY-III8型电泳仪,北京六一

仪器厂;PE-9600PCR基因扩增仪,美国PE公司;凝胶成像系统,英国UVB公司。

2方法

2.1细胞培养及实验分组

A549细胞贴壁生长于含10%胎牛血清,100u/L青霉素、100μg/mL链霉素的

DMEM培养基中,37℃、5%CO2培养箱培养,倒置显微镜下观察细胞形态良好无退

化,每3～4d传代一次,隔日换液,取对数生长期细胞进行实验。实验分为对照组和

沙利度胺5,10,20,40,60mg/L剂量组。沙利度胺以无菌的二甲亚砜(DMSO)溶解

并配制成20mg/mL的贮存液,临用时用DMEM培养基稀释至所需浓度。

2.2MTT法检测细胞增殖抑制率

将对数生长期的A549细胞重悬于含10%胎牛血清的DMEM培养