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Ｍｅｄｉｃｉｎｅ—．ｎ１７．２Ｎｏ．１Ｍａｒ．．２００２

应用ＮＡＳＢＡ定量检测ＨＣＶＲＮＡ的研究进展

骆利敏黄建生李明

第一军医犬学热带病研究所（广州５１００１５）

【捕要】ＮＡＳＢＡ（ｎｕｃ｜ｅｌｃａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅ￣ｂａｓｅｄａｍｐ｜ｆｉｉｃａｔｉｏｎ）Ｐ４￣桉酸序列依赖性扩增法，是由一对引物介导的、连

续均一的、体外特异性棱苷酸序列等温扩增的ＲＮＡ新技术。反应在４２＂Ｃ进行，可在２ｈ内将１ＬＮＡ模板扩增约ｌＯ

倍。本文综述ＮＡＳＢＡ在ＨＣＶＲＮＡ定量检测中的应用。

【关键词】ＮＡＳＢＡ；ＨＣＶ；检测

中围分类号：Ｐｃ５１２６３文献标识码：Ａ文章编号：０２５４—９００Ｘ（２００２｝０１—００６４—０３

１９９１年，加拿大Ｃａｎｇｅｎｅ公司首先介绍了核酸高温变性步骤，不会受到外来双链ＤＮＡ的污染。

序列依赖性扩增法（ｎｕｃｌｅｕｉｃａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃ￣ｂａｓｅｄ且反应速度快，忠实性好，特异性强，敏感性高。若

ａｍｐ１ｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＮＡＳＢＡ），与普通ＰＣＲ不同的是，反应中加人变性步骤，ＮＡＳＢＡ不仅能扩增ＲＮＡ，而

ＮＡＳＢＡ是由一对引物引导的，连续均一的体外特且能扩增双链ＤＮＡ。

异性核苷酸序列等温扩增的酶促反应。反应在Ｆ义ｓＲＮＡ

４２℃进行，可在２ｈ内将模板ＲＮＡ扩增１０。倍，此、一

ｔ

ｍ～

常规ＰＣＲ法高ｌ０倍，不需特殊仪器，是一种快速，

简便，特异的扩增手段。ＮＡＳＢＡ既可检测ＲＮＡ，又

可用于ｍＲＮＡ测序。在病原体检测，基因异常的筛ＡＨ日＾

选，肿瘤的诊断与监控，疾病易发性检测等方面，也

～

有着广阔的应用前景。竹ｔｔＮＡ多聚酶

反义自ｓＨＡ

扩增

ＮＡｓＢＡ的１原理引物２～、＾Ｔ７ＲＮＡ多聚酶

标准ＮＡＳＢＡ反应体系包含ＡＭＶ（鸟成髓细胞半；；；●ＡＭＹＲＴ

Ｉ不同温度扩增

瘤病毒）逆转录酶，ＲＮＡ酶Ｈ，ＲＮＡ聚合酶，

ｄＮＴＰ，ＮＴＰ，两个特殊的引物和适宜的缓冲掖。引引斯１

物Ｉ长约４５ｎｔ，３末端约有２０ｎｔ与模板３互补，其围１桉酸序列依赖性扩增法示意围

５末端含有可被ＴＲＮＡ７聚合酶识别的启动子序（ＲｅｅｓｌｎｋＨＷＨｅｐａｔｉｔｉｓＣＶｉｒｕｓ．ＫＡＲＧＥＲ，１９９８：７