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GRα-GST融合表达载体的构建及重组蛋白的表达

涂继方;温成平;孙静;徐莉;谢志军

【摘要】[Objective]TostructurefusionproteinGRα-GSTforscreeningthe

glucocorticoid-likeChinesemedicines.[Methods]AmplifiedtheGRαgem

sequencecontainingCDSbyRT-PCRandthenligatedtoT-AvectorPMD-

18.AmplifiedtheGRctORFcontainingBamHIandXhoIsiteonthe

templateoftherecombinantPMD-18.FusionproteinGRa-GSTwas

expressedinE.coli(BL21)andinducedbyIPTG.[Results]GRαsequencewas

insertedtopGEX-4T-1vectorandthefusionproteinGRct-GSTwas

expressedsuccessfully.[Conclusion]Weobtainedtherecombinant

plasmid(pGEX-4T-1-GRα),andfusionproteinGRα-GSTcouldbeexpressed

inE.colibytheinductionofIPTG.%[目的]构建GRα-GST融合表达载体并获得

重组蛋白,以期为筛选类糖皮质激素样中药提供工具.[方法]运用RT-PCR扩增得到

包含CDS的GRα基因序列后,经T-A克隆插入PMD-18载体.以此重组载体为模

板扩增含有BamHI与XhoI酶切位点的GRαORF,插入pGEX-4T-1载体后形成

了重组载体,并使其在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达融合蛋白,再用SDS-

PAGE检测融合蛋白的表达.[结果]成功的将GRα-全基因构建入原核表达载体

pGEX-4T-1中.测序结果表明载体构建成功,无插入和移码突变.经IPTG诱导后获得

与预测大小(112kDa)完全一致的目的蛋白即GRα-GST融合蛋白.[结论]成功获得

了含重组载体的大肠杆菌,并在IPTG诱导下较好的表达,得到了GRα-GST融合蛋

白.

【期刊名称】《浙江中医药大学学报》

【年(卷),期】2012(036)011

【总页数】4页(P1211-1213,1217)

【关键词】糖皮质激素受体α;融合蛋白;原核表达;pGEX-4T-1载体

【作者】涂继方;温成平;孙静;徐莉;谢志军

【作者单位】浙江中医药大学杭州310053;浙江中医药大学杭州310053;浙江中

医药大学杭州310053;浙江中医药大学杭州310053;浙江中医药大学杭州

310053

【正文语种】中文

【中图分类】R331

糖皮质激素（GC）是由肾上腺皮质束状带分泌的一类甾体激素，具有抑制免疫应

答、抗炎、抗毒、抗休克等作用。GC主要通过与糖皮质激素受体（GR）结合而

发挥作用。GR是存在于细胞内的配体依赖的转录活化因子，属于核激素受体超家

族的成员[1-2]。其通过介导GC发挥作用，主要分为α、β两种亚型。GRα与糖

皮质激素结合后，与热休克蛋白HSP分离，并形成二聚体转移入核内与靶基因启

动子区域的糖皮质激素反应元件（GRE）发生特异性结合，或与其它转录因子发生

蛋白-蛋白相互作用，通过调节下游基因的表达发挥生物学效应[3]。鉴于GC在风

湿病治疗方案中的重要地位以及GRα在GC信号转导中的重要作用，本实验拟通

过重组GRα-GST融合蛋白，用于筛选类糖皮质激素样中药单体。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1材料大肠杆菌DH5α和Bl21，PMD-18载体，原核载体表达载体pGEX-

4T-1。

1.1.2试剂Trizol（invitrogen）、SuperScriptVILOcDNA合成试剂盒

（invitrogen）、质粒提取试剂盒（QIAGENE）、内切酶（takara公司）、LB培

养基。

1.1.3仪器台式高