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人FGF21原核表达载体的构建及重组蛋白表达

张礼林;唐青蓝;许庆忠;雷霆雯;李红梅

【摘要】Preparationofprokaryoticexpressionconstructsofhuman

FGF21(fibroblastgrowthfactor,FGF)cDNAandinductionofrecombinant

hFGF21proteinexpression.TotalRNAwasextractedfromhumanliver,and

thetargetcDNAfragmentwasobtainedusingRT-PCR.Theamplified

cDNAfragmentwasclonedintopMD19-Tforpreservation.Thenthe

expressionconstructpET-28a(+)-hFGF21wassuccessfullyconstructedand

expressedwithIPTGinduction,andthehis-hFGF21proteinwaspurified

withhistide-selectivenickelaffinitygelandidentifiedbyWesternblot.

Westernblotanalysisshowedthatthefusionproteinhadspecificbinding

withaFGF21antibody.%构建人FGF21（fibroblastgrowthfactor，FGF）

cDNA的原核表达载体并诱导其重组蛋白表达。提取人肝脏总RNA后，经RT-

PCR扩增获得目的片段，构建其T载体进行保存。再构建重组原核表达载体pET-

28a（+）-hFGF21，重组质粒转化至大肠杆菌菌株BL21（DE3）中，在IPTG诱

导下得到可溶性表达，采用亲和层析法纯化表达产物后，进行Westernblot鉴定。

成功构建重组质粒pET-28（+）-hFGF21，对其进行可溶性表达后成功纯化出

his-hFGF21，经Westernblot鉴定该融合蛋白可与FGF21抗体特异性结合。成

功构建pET-28（+）-hFGF21，并可溶性表达his-hFGF21蛋白。

【期刊名称】《生物技术通报》

【年(卷),期】2015(000)003

【总页数】5页(P218-222)

【关键词】人成纤维细胞生长因子(FGF21);克隆;原核表达;蛋白纯化

【作者】张礼林;唐青蓝;许庆忠;雷霆雯;李红梅

【作者单位】贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室，贵阳550004;海南省第

三人民医院检验科，三亚572000;贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室，贵

阳550004;贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室，贵阳550004;贵阳医学院

生物化学与分子生物学教研室，贵阳550004

【正文语种】中文

成纤维细胞生长因子（fibroblastgrowthfactor，FGF）是一类由FGF基因家族

成员编码的结构相关蛋白质。目前，已经发现其家族有23个成员，其中心区域都

含有一段同源性为30%-70%的氨基酸序列［1］。庞大的FGF家族成员可调节生

物代谢；调控细胞增殖、迁移和分化；参与肿瘤的发生和发展［2，3］。FGF21

是FGF家族的一个新成员，是一种可分泌的蛋白［4］，近年来已经成为国际上研

究肥胖和糖尿病的热点基因之一。FGF21可以降低血糖浓度，其对糖代谢的调节

既不依赖于胰岛素，又能够增强胰岛素的敏感性，促进胰岛β细胞的存活，还可

以降低胰岛素的使用浓度，改善胰岛素抵抗［5-9］。同时，FGF21可以调节脂代

谢，改善脂蛋白图谱，降低血浆中低密度脂蛋白胆固醇，甘油三酯水平，并提高高

密度脂蛋白胆固醇［10］。多项研究证明，糖尿病患者血清FGF21的表达量增高

［11-13］，且FGF21水平增高是2型糖尿病独立危险因素［14］。此外，在肥

胖个体中FGF21的血清水平上升［12］。本研究拟构建人FGF21的原核表达载

体，并对其进行诱导表达和纯化，以获得人FGF21的融合蛋白