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破伤风类毒素单克隆抗体的制备及初步鉴定

张秀昌刘芳崔萍孙黎罗强贾天军

【摘要】目的：制备并鉴定破伤风类毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株，

为破伤风的快速检测及致病机制的研究提供实验材料。方式：用破伤

风类毒素做抗原免疫BALB/C小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融

合，取得分泌高滴度针对破伤风类毒素的杂交瘤细胞株，测定单抗免

疫球蛋白亚类及单抗效价，用间接ELISA和Westernblot检测单

克隆细胞株的特异性。结果：通过细胞融合和克隆化，挑选出3株持

续分泌抗破伤风类毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E1二、1E1一、

1G10。间接ELISA和Westernblot检测结果说明1E1二、1E1一、

1G10能够和破伤风类毒素发生特异性反映。结论：成功制备了抗破伤

风类毒素单克隆抗体，为制备免疫诊断试剂盒和抗体药物的开发奠定

了基础。

【关键词】破伤风类毒素；杂交瘤；单克隆抗体

【ABSTRACT】Objective:Toestablishandpreparehybridomacell

linesecretingmonoclonalantibody(McAb)againsttetanic

toxoid,todeveloparapidassayforTetanusandinvestigatethe

pathogenesisofthevirus.Methods:BALB/cmousewasimmunized

bypurifiedtetanictoxoid.Hybridomacelllinessecreting

monoclonalantibodies(McAbs)againsttetanictoxoidwere

screenedafterthefusionofmousespleniccellswithSP2/0cells.

TheIgsubtypesandtiteroftheMcAbswereassayedwithELISA

andWesternblotassay.Results:Aftercellfusionand

subcloning,threehybridomacelllinessecretingmonoclonal

antibodiesspecificallyagainsttetanictoxoidwereobtained,

andrespectivelynamedas1E12,1E11and1G10.IndirectELISA

andWesternblotassayshowedthattheMcAbs1E12,1E11and

1G10couldspecificallyrecognizetetanictoxoid.Conclusion:

ThespecificantitetanictoxoidMcAbsaredevelopedandthese

McAbsmaybeusefulinthedevelopmentofdetectionassayand

basicresearchofthepathogenesisofTetanus.

【KEYWORDS】Tetanictoxoid;Hybridomacellline;Monoclonal

natibodies

破伤风梭状杆菌是引发破伤风的病原菌，当机体受到外伤，创口被污

染，或临盆时利用不洁器械剪断脐带等，本菌可侵入局部创面而引发

外源性感染，发芽繁衍，释放毒素,在进展中国家，新生儿破伤风死亡

率可高达90%。目前对破伤风的诊断要紧依照典型的病症和病史。单

克隆抗体用于诊断感染性疾病具有灵敏度高、特异性强的特点，在许

多疾病的诊断中已取得普遍应用。本实验第一次成功制备破伤风类毒

素单克隆抗体，为单抗应用于破伤风的临床诊断奠定了基础。

1资料与方式

1．1试剂、毒素、细胞与实验动物破伤风类毒素由北京生物制品监

定所提供。福氏完全佐剂及福氏不完全佐剂购自北京市普京康生物工

程技术。BALB/C小鼠购自首都医科大学动物室。SP2/0细胞由北京肿

瘤研究所惠赠。聚乙二醇（PEG，MW1000，）为