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基因组学与应用生物学，2020年，第39卷，第9期，第4136-4144页

研究报告

ResearchReport

两种不同的原核表达载体蛋白表达及纯化的比较

邱淑彬1,2荆韧威3郭正隆3谢晓东1,2*

1天津农学院农学与资源环境学院,天津,300384;2天津市作物抗逆的机理及遗传改良国际联合研究中心,天津,300384;3天津医科大学基础

医学研究中心,天津-牛津基因治疗联合实验室,天津,300070

*通信作者,*************.cn

摘要为了比较两种不同的原核表达载体体外表达纯化CP05-GFP蛋白的能力，本研究通过构建

pET28b-CP05-GFP(双His-Tag)、pET28b-CP05-GFP(单His-Tag)、pGEX-6p-1-CP05-GFP(GST-Tag)三个原

核表达质粒，诱导表达并纯化带有不同标签的CP05-GFP蛋白。通过考马斯亮蓝染色技术比较两种不同的原

核表达载体表达以及体外纯化CP05-GFP蛋白的能力，发现3个原核表达载体均能诱导表达出CP05-GFP蛋

白，且能纯化出CP05-GFP蛋白，但是不同标签纯化CP05-GFP蛋白的纯化效率是不同的：pET28b-CP05-GFP

(双His-Tag)原核表达系统能够表达并纯化出CP05-GFP蛋白，但其表达量低易纯化；pET28b-CP05-GFP(单

His-Tag)原核表达系统能够表达并纯化出CP05-GFP蛋白，其表达量高但不易纯化；pGEX-6p-1-CP05-GFP

(GST-Tag)原核表达系统可表达出足量的CP05-GFP(GST-Tag)蛋白，并且易纯化。本研究有助于选择合适的

载体进行融合蛋白的表达和纯化。

关键词原核表达,载体构建,蛋白纯化

ComparisonofTwoDifferentProkaryoticExpressionVectorsinProtein

ExpressionandPurification

QiuShubin1,2JingRenwei3GuoZhenglong3XieXiaodong1,2*

1CollegeofAgronomyandResourceEnvironment,TianjinAgriculturalUniversity,Tianjin,300384;2TianjinJointResearchCenterforCropStress

ResistantandGeneticImprovement,TianjinAgriculturalUniversity,Tianjin,300384;3Tianjin-OxfordJointLaboratoryGeneTherapy,ResearchCen-

terofBasicMedicalScience,TianjinMedicalUniversity,Tianjin,300070

*Correspondingauthor,*************.cn

DOI:10.13417/j.gab.039.004136

AbstractTocomparetheabilityoftwodifferentprokaryoticexpressionvectorsintheexpressionand

purificationofCP05-GFP,thepET28b-CP05-GFP(DoubleHis-Tag),pET28b-CP05-GFP(SingleHis-Tag)

invitro

andpGEX-6p-1-CP05-GFP(GST-Tag)expressionvectorswereconstructed.Afterwards,theCP05-GFPproteins

withdifferenttagswereexpressedandpurified.Theexpressionefficiencyofthesetwovectorsandtheabilityof

differenttagstopurifytheCP05-GFPproteinswerecomparedbycoomassiebluestaining.TheCP05-GFPproteins

withdifferentTagscouldbeobtainedfro