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基因敲除小鼠的实验流程
一、前期准备
1、检索标记基因：采用全基因组测序技术或大规模基因组关联分析
法筛选出敲除对研究有重要作用的基因；
2、设计敲除构建：根据筛选出的基因特异性序列，对基因进行深入
分析，结合已有研究成果，根据基因的功能和结构确定可有效敲除的基因
结构模型；
3、制备修饰质粒：根据设计模型，制备适当的质粒，使其具有足够
的重组能力和具有全套的特异性对象；
4、选择载体：选择合适的载体（含有敲除的质粒），使敲除的基因
更容易被载入小鼠细胞中进行修饰；
二、基因敲除实验
1、小鼠胚胎动物模型：小鼠胚胎是敲除小鼠研究的传统动物模型，
采用小鼠母体体外受精，利用载体质粒将敲除基因引入胚胎，敲除的基因
将被遗传给后代小鼠；
2、小鼠嵌合体模型：采用基因修饰技术将敲除基因嵌入小鼠细胞的
质粒，多功能的抗体定位蛋白可以用来将质粒载入小鼠细胞，利用抗体定
位系统，将修饰的嵌入小鼠胚胎，诱导而成嵌合体，使敲除的基因能够传
递给后代；
3、选择敲除后的小鼠：将敲除实验的小鼠孵化。
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