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生化仪ABS界限值说明
ABSlimit:即吸光度界限值,对于速率法的项目来说的。
当浓度或活性超过定量范围时,就无法得到正确的数据,因
此对吸光度设定一个界限值。
举ALT下降反应来说,一般反应ABS要求在1.0A以上,目
的是为了当遇到试剂的定量范围高值时,比如1000U/L时,
反应检测点的曲线仍为线性,因此需要有一定的吸光度保
证,这个1.0A就是保证1000U/L时反应检测点的曲线仍为
线性(注意:不是整个曲线),当然低于1.0A并不是不能用,
检测低值还是可以的,但对高值就不准了,一般仪器也会报
警告诉线性不好,结果不可靠。警告诉线性不好,结果不可靠。当然低于1.0A并不是不
能用,检测低值还是可以的能用,检测低值还是可以的。不可以这么说,因为此处的
1.0A指示的是反应底物的浓度,低于1.0就是底物浓度过低,
在酶类反应过程中当底物浓度过低时反应速度不再与酶活
性成正比,造成线性段缩短,线性限降低,再因为测定时间
参数都是测试前设置好的,不可能临时去调整(GLP也不允
许),这样即便是低值样品也很有可能读取到非线性段,结
果就不可靠了。所以,试剂厂家为了从反应底物方面保证结
果可靠性,会给出具体的吸光度限定值。
再从另一个角度说:样品值的高低事先是不知道的,只有测
定了才知道,如果审核结果时不看反应曲线,单看结果数值,
真值是高值样品就会发出错误报告。这和看血常规的直方
图、散点图去审核结果一样。
教科书上关于酶类反应速度的解释:
我可能对楼主的ABSlimit理解有误,楼主的概念可能是反
应中的ABSlimit,那么其意义就如同我下面所说的第二点。
在这里不想就ABSlimit到底是什么来谈,就想说仪器是如
何保证速率法结果准确的。以下以日立仪器,ALT试剂来谈。
1.首先,仪器有S1ABSlimit,在这里的设置是为了保证试
剂的线性高值能达到要求说设的。具体可参照我9楼的内容。
2.然后,仪器有ABSlimit设置,这是对反应曲线的观察,
这个设置是对试剂的经验指数,比如ALT,一般吸光度降到
4000-6000后就很难保证反应成线性了,因此一般就将ABS
limit设置为4000-6000,当反应的点低于此点后仪器就会
报警。
3.最后,仪器有线性判断,对检测点间的线性进行判断,
可以发现是否有跳点,或者底物耗尽等,当然此线性判断的
标准是不高的。实际在反应中,虽然是零级反应,但由于试
剂反应体系、仪器的误差,每个检测点间隔值并不是一样的,
有时差别还不小。到后期时会越来越小。研发人员一般都是
参照实际检测结果来调整试剂原料量。
通过这三点,仪器基本就能保证速率法试剂检测结果的正确
性,除试剂本身有问题除外。
在9楼时我说低于1.0A也可用,是基于省钱的目的,因为
根据前面说述第2、3点,对于高值如果底物耗尽自然会报
警的,现在有的仪器都允许用户检测后调整检测点,都是为
了方便用户。当然同时能保证第一点就更好了。
至于10楼所说的低于1.0就是底物浓度过低,在酶类反应
过程中当底物浓度过低时反应速度不再与酶活性成正比,造
成线性段缩短,线性限降低。后半段正确,前半段不能说对
错,看怎么理解。我这里只是说虽然空白在1.0A以上,但
检测中检测点的吸光度在1.0A以下是很常见的,当然对计
算也没啥问题,还有上面的第二点来保护结果的准确。
我来说两句:
1.S1ABSlimit是用来监测校准的,就是水加试剂后的反应
中A不能超过或低于某个值,报警说明试剂质量有问题或设
置有误。
2.ABSlimit就是底物耗尽限,主用来监测标本测定的,报
警说明样本浓度过高或试剂变质或设置有误。
3.线性限常设为15%(进口试剂),宽点的也有设30%(国产
试剂),监测速率法测定过程中反应点是否成直线的,报警
说明结果差,原因有光源灯老化、标本混浊、试剂变质等。
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