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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号CN111087464A
(43)申请公布日2020.05.01
(21)申请号201911384531.4C12N9/02(2006.01)
C12N15/53(2006.01)
(22)申请日2019.12.28
C12N1/21(2006.01)
(71)申请人河北纳科生物科技有限公司C12R1/19(2006.01)
地址050035河北省石家庄市高新区祁连
街95号慧谷大厦A座22层2208
(72)发明人徐兰举齐磊刘鑫申翠美
杜亚东
(74)专利代理机构石家庄德皓专利代理事务所
(普通合伙)13129
代理人刘磊娜
(51)Int.Cl.
C07K14/78(2006.01)
C12N15/12(2006.01)
C12N15/70(2006.01)
C12N15/66(2006.01)权利要求书1页说明书8页
序列表4页附图10页
(54)发明名称
一种具有功能结构的重组人源III型胶原蛋
白及其表达方法
(57)摘要
本发明涉及一种具有功能结构的重组人源
III型胶原蛋白及其原核表达方法，所述的人源
III型胶原蛋白的编码基因的核苷酸序列为SEQ
IDNO:3所示，通过与基因序列为SEQIDNO:4的
羟化酶Hy726共同表达，得到具有三级螺旋结构
的重组人源III型胶原蛋白，该蛋白具有更好的
稳定性和功能性，更能媲美天然人源III型胶原
蛋白生物活性。
A
4
6
4
7
8
0
1
1
1
N
C
权利要求书
CN111087464A1/1页
1.一种具有功能结构的重组人源III型胶原蛋白，其特征在于，其具有三级结构，其编
码基因的核苷酸序列为SEQIDNO:3所示。
2.一种参与如权利要求1所述的胶原蛋白表达的羟化酶Hy726基因，其特征在于，其核
苷酸序列为为SEQIDNO:4所示。
3.一种包含如权利要求1所述人源III型胶原蛋白的编码基因和如权利要求2所述的羟
化酶Hy726基因的重组表达载体pACYCDuet1-Hy726-1230。
4.一种含有如权利要求3所述重组表达载体pACYCDuet1-Hy726-1230的重组基因工程
菌，其特征在于，所述重组基因工程菌的宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。
5.一种如权利要求1所述的具有功能结构的重组人源III型胶原蛋白原核表达方法，其
特征在于，具体包括如下步骤：
（1）基因设计和合成
依据人源III型胶原蛋白氨基酸序列SEQIDNO:1和巨型病毒4-脯氨酸羟化酶氨基酸
序列SEQIDNO:2，反向设计基因序列，进行密码子优化，得到人源III型胶原蛋白的编码基
因序列SEQIDNO:3和羟化酶Hy726基因序列SEQIDNO:4，进而根据SEQIDNO:3和SEQID
NO:4所示基因序列，分别进行全基因合成；
（2）重组表达载体pACYCDuet1-Hy726-1230的构建：
a）将所述人
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