三磷酸腺苷法在指导膀胱移行细胞癌术后膀胱灌注化疗中的体外敏感性研究.pdfVIP

三磷酸腺苷法在指导膀胱移行细胞癌术后膀胱灌注化疗中的

体外敏感性研究

摘要】

目的：探讨应用三磷酸腺苷生物荧光抗癌药物敏感性测验（ATP一TCA）技

术指导膀胱癌进行化疗。方法:采用ATP对19例病人进行肿瘤药敏试验,根据实验

结果进行个体化膀胱灌注治疗。并与同期26例使用比柔比星进行膀胱灌注化疗

的病人作为对照组,观察两组病人术后肿瘤的复发情况。结果:⑴药敏组和对照组

术后肿瘤的复发率差异具有统计学意义⑵药敏组中出现多重耐药相关性具有统计

学意义。结论:采用ATP一TCA进行体外药物敏感性实验后采取个体化灌注化疗

能够减少TCCB的复发。

【关键词】膀胱移行细胞癌;AfP一TCA法;多重耐药

【中图分类号】R3226+2

【文献标识码】B【文章编号】16748999(2013)12026002

膀胱癌是泌尿系统中最常见的肿瘤，在我国膀胱癌在泌尿系统肿瘤中占首位,

且近年有上升趋势，膀胱癌中约90%为移行细胞癌［1］。膀胱癌易复发,常多中

心发生,癌周常伴上皮异生,与膀胱癌术后复发、进展有关［2］。ATP一TCA法采

用荧光素一荧光酶系统测定ATP浓度,能增强化疗敏感性和特异性,其结果重复性、

稳定性较其他方法佳,易标准化。

1材料与方法

11标本的收集:选择本院泌尿外科收治经病理证实为TCCB并保留膀胱的病

人19例，男14例,女5例;年龄27~83岁,平均年龄5747岁。病例分级:I级15

例,Ⅱ级3例,Ⅲ级3例;病理分期:Tl期13例,T2期5例,T3期l例。

12主要仪器设备:C02培养箱(进口)，倒置显微镜(进口)，高速离心机(进口)，

冰箱(进口)，荧光显微镜(进口)，培养所需的相关产品(培养基、一次性培养皿

等)(进口)，培养基(国产)，96孔培养板(国产)，10ml无菌移液管(国产)，无菌试剂

池(国产)，50ml无菌锥形塑料离心管(国产)，多道加样器(Zooul)(国产)，血细胞计

数板(国产)，细胞培养箱(国产)，荧光发光检测仪(国产)，150一200目灭菌细胞

筛(国产)，无菌平皿(国产)。

13主要试剂:ATP一TCA实验试剂(北京金紫晶生物医药技术有限公司生产)，

组织消化酶，ATP提取液，荧光酶一荧光素系统，ATP生成抑制剂，荧光酶工作

液，红细胞裂解液，ATP标准，0O15MPBSPH72，标本浸泡液，RPMI1640培

养液(不含血清)，无菌去离子水，台盼兰溶液。

14实验方法

141肿瘤组织的收集和处理:临床上诊断为膀胱癌的患者,在行手术治疗时

(包括开放手术及TUR一BT)留取较完整的新鲜肿瘤组织,放入消毒的生理盐水中送

实验中心进行药敏实验.

142ATP一TCA法体外药物敏感性实验步骤:ATP一TCA体外肿瘤药物敏

感性实验的主要步骤为①实体肿瘤单细胞悬液制备:将手术取下的较纯净新鲜瘤

组织进行清洁后立即浸入RPM11640溶液中,在最短时间内(3小时内)送抵实验室，

用PBS清洗其表面3次后,将标本置于标本浸泡液中浸泡15分钟,除去标本浸泡液,

剥离肿瘤标本表面的结缔组织、纤维和脂肪,用无菌剪刀将标本剪碎成lmm3的碎

块,然后将其转移至含组织消化液的离心管中。将离心管倾斜置于37℃孵育箱中

孵育15一3小时,每隔15一30分钟振摇一次,使其充分消化。随后将消化好的

混合液通过细胞筛.②肿瘤细胞接种于多孔板,设置不加药对照,在不同药物浓度(各

药物的浓度依据其在人体中血药浓度峰值进行配制)作用下培养5一7d,药物分别

为:丝裂霉素(浙江海正药业股份有限公司国药准字1111172mg/支)、

吡柔比星(深圳万乐药业有限公司国药准字1210C610mg/支)、羟基喜

树碱(湖北华源世纪药业国药准字1205042ml:5mg)、甲氨喋吟(江苏恒

瑞医药股份有限公司国药准字1107041201g/支)、顺铂(齐鲁制药有

限公司国药