重组DNA技术详细概述(ppt-41页)(共40张PPT).pptx

重组DNA技术;;编码链，有意义链，Crick链;;基因克隆的载体;;;;;将外源基因或序列导入载体的工具;限制性内切酶;聚合酶链式反应（PCR）

大肠杆菌是最常用的原核宿主菌，原因是对它比较了解，操作起来也特别容易。

基因芯片是随着“人类基因组计划”和其它模式生物基因组计划的进展而发展起来一门新技术，也叫DNA芯片、DNA微阵列或寡核苷酸阵列，它采用原位合成或显微打印手段，将数以万计的DNA探针固定在支持物表面上，产生二维DNA探针阵列，然后，与标记的样品分子进行杂交，通过检测杂交信号的强弱，对生物样品进行快速、并行和高效地检测或医学诊断，由于常用硅芯片作为固相支持物，且在制备过程运用了计算机芯片的制备技术，所以称之为基因芯片技术。

整个PCR反应由多个循环组成（循环次数为30次~40次），每循环一次，DNA复制一次。

使用酶切将目的基因直接从另一种克隆载体中释放出来

细菌人工染色体的结构和外源DNA的插入

不同类型的限制性内切酶的切点性质以及粘端之间的退火

常见的几种RE识别的碱基序列和切点性质

准备供体动物，分离受精卵；

不同类型的限制性内切酶的切点性质以及粘端之间的退火

λ噬菌体载体的构建、重组和包装

这类酶的作用需要Mg2+、SAM及ATP；

一般说来应用基因芯片分5步进行：（1）生物学问题的提出和芯片设计与制备；

PCR使用的引物是人工合成寡聚DNA，而不是像体内由引发酶合成的RNA；

克隆基因在宿主细胞中的表达

原位光蚀刻法合成制作基因芯片的基本流程;;宿主细胞;将重组DNA引入到宿主细胞的途径;重组体的选择和筛选;;基因克隆的详细步骤;获取目的基因的手段;目的基因与载体的连接;基因克隆的应用;文库的建立;;;;克隆基因在宿主细胞中的表达;;;培育转基因动物的基本步骤;基因治疗;基因敲除;聚合酶链式反应（PCR）;;蛋白质工程;基因芯片;;;基因芯片的应用;获得外源DNA序列和目的基因；

这包括提高Vmax、降低Km值、改变最适pH、去除抑制剂作用位点、改变反应的特异性或去除导致蛋白质不稳定的氨基酸残基等；

蛋白质工程一般有三个目的：（1）改变催化性质。

这包括改善热稳定性、提高在有机溶剂中的稳??性、改变理化性质或改变对配体结合的特异性；

聚合酶链式反应的基本过程

DNA限制性内切酶图谱分析

常见的几种RE识别的碱基序列和切点性质

宿主细胞是接受、扩增和表达重组DNA的场所。

原位光蚀刻法合成制作基因芯片的基本流程

PCR使用的引物是人工合成寡聚DNA，而不是像体内由引发酶合成的RNA；

针对不同的表达系统，需要构建不同的表达载体。

理论上，任何活细胞都可以作为宿主细胞，但最为常用的宿主细胞有大肠杆菌、酵母、草地贪夜蛾的培养细胞和哺乳动物的培养细胞等。

不同类型的限制性内切酶的切点性质以及粘端之间的退火

对出生的小鼠进行筛选，挑出转基因小鼠。

一般说来应用基因芯片分5步进行：（1）生物学问题的提出和芯片设计与制备；

（2）退火—降低温度（通常在50℃–65℃），以使引物与模板DNA配对；;