一种异淀粉酶及其基因、含有该基因的工程菌及其应用 .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN105886519A

(43)申请公布日2016.08.24

(21)申请号CN201610368731.0

(22)申请日2016.05.30

(71)申请人南京农业大学

地址211225江苏省南京市溧水区白马镇国家农业科技园南京农业大学基地

(72)发明人崔中利李周坤冀凯黄彦

(74)专利代理机构南京天华专利代理有限责任公司

代理人傅婷婷

(51)Int.CI

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

一种异淀粉酶及其基因、含有该基

因的工程菌及其应用

(57)摘要

本发明属于应用工业微生物领域，

公开了一种异淀粉酶及其基因、含有该基

因的工程菌及其应用。本发明提供了淀粉

水解酶系中关键酶之一的异淀粉酶基因，

该基因全长为2436bp，G+C含量为66％，

编码811个氨基酸，其核苷酸序列为：

SEQIDNO.1所编码的内切酶蛋白质氨基

酸序列为：SEQIDNO.2。利用该基因构建

的工程菌株能高效表达异淀粉酶，该酶以

土豆淀粉为测活底物，通过碘液检测异淀

粉酶的活性，其比活力高达70600U/mg。

利用基因生产的酶制剂可用于粮食加工、

食品工业、酿造、发酵、纺织工业和医药

等工业，在解决实际问题的同时还可以取

得可观的经济效益。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种异淀粉酶基因，其核苷酸序列为：SEQIDNO.1。

2.权利要求1所述的异淀粉酶基因编码的异淀粉酶蛋白质,其氨基酸序列为：SEQ

IDNO.2。

3.含权利要求1所述异淀粉酶基因的重组质粒。

4.根据权利要求3所述的重组质粒，其特征在于所述的重组质粒是将权利要求1所

述异淀粉酶基因克隆到质粒pEFaA中所得。

5.含权利要求1所述的异淀粉酶基因的重组微生物。

6.根据权利要求5所述的重组微生物，其特征在于主要以毕赤酵母为宿主菌。

7.权利要求2所述异淀粉酶蛋白质联合其他淀粉水解相关酶在淀粉加工或工业生产

方面的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于所述的其它淀粉水解相关酶为α-1,4淀

粉酶内切酶。

9.权利要求1所述异淀粉酶基因在淀粉加工、食品以及饲料等领域的基因工程应用。

10.权利要求2所述异淀粉酶蛋白质作为酶制剂在淀粉加工、食品以及饲料等领域

的生产应用。

说明书

p技术领域

本发明属于应用工业微生物领域，公开了一种异淀粉酶基因、含有该基因的工程菌

及其应用。

背景技术

淀粉作为地球上含量最为丰富的聚合物之一，是由葡萄糖单体单元以葡萄糖苷键连

接而成的，根据糖苷键的区别分为两种重要组分：直链淀粉(线性α‐1,4键连接的

葡聚糖)和支链淀粉(线性α‐1,4键连接的葡聚糖上连有α‐1,6键的支链)，虽然

α‐1,6键只占总糖苷键的6％左右，使得淀粉糖链形成了分支结构。淀粉由于其结

构的复杂性，单一酶类难以将其彻底的水解，因此在淀粉处理过程中通常需要多种

酶协同作用，包括α‐淀粉酶以及淀粉脱支酶等。

异淀粉酶(EC3.2.1.68)是一种主要的淀粉脱支酶，为糖原6‐葡聚糖水解酶，对糖

原，支链淀粉以及极限糊精中的α‐1,6‐糖苷键具有不同程度的水解作用，但对

普鲁兰多糖则没有水解作用。即仅能水解分支点的α‐1,6糖苷键。异淀粉酶在淀

粉深加工工业具有重要的价值，可以与α‐1,4‐淀粉酶、糖化酶等淀粉酶配合使

用生产葡萄糖、麦芽糖、部分麦芽寡糖、环糊精以及抗性淀粉等产品，提高淀粉的

转化效率。基于异淀粉酶特殊的性质使其在不同领域具有广泛的应用前景，如在饲

料中添加异淀粉酶可以提高日粮的消化利用率，在配合其他淀粉水解酶处理淀粉过

程中可以