男科学实验室诊断进展.ppt

**************精子DNA完整性检测亦称精子染色质结构分析，SCSA），是应用流式细胞仪检测精子功能的方法之一。精子发生过程中，鱼精蛋白逐步取代组蛋白与DNA结合。精子进入附睾后，鱼精蛋白的组成不再改变。但附睾中精子在逐步成熟的过程中，鱼精蛋白中大量的巯基(SH)不断被氧化成二硫键(S=S)，与DNA结合更加紧密，使DNA更具抗酸能力，维持了双链结构的稳定性。精子DNA完整性检测（流式细胞仪）第21页,共52页，星期六，2024年，5月而染色质异常的精子，鱼精蛋白中多数巯基未被氧化，在酸的作用下易变性为单链DNA。根据这一原理，用酸处理精液样品，再行吖啶橙(AO)染色，AO可与双链DNA结合呈单体形式发出绿色荧光，与单链DNA结合呈聚合物形式发出红或黄色荧光。然后通过配有专用软件的流式细胞仪可进行数据处理得出SCSA参数。精子DNA完整性检测（流式细胞仪）第22页,共52页，星期六，2024年，5月二、生精细胞检查与睾丸活检1、生精细胞检查精液中除成熟的精子外，亦可见未成熟的生精细胞，包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、早期和晚期精子细胞等生精细胞检查方法：染色法荧光原位杂交单克隆抗体免疫组化法流式细胞术第23页,共52页，星期六，2024年，5月2、睾丸活检开放活检、细针穿刺、活检枪、高能多谱勒超声为基础的睾丸活检70年代FSH可用放免方法测定，FSH水平可以反映生精功能受损程度，睾丸活检范围逐渐缩小，其适应证仅限于睾丸体积正常、FSH水平正常或轻度增高的无精子症病人。80年代，精浆生化指标的测定可排除阻塞性无精子症，睾丸活检范围更小。近年来，随着显微外科的发展和显微受精技术的应用，从精液中分离一条精子即可使卵子受精达到生育目的。因此，需行睾丸活检的病例更是寥寥无几。第24页,共52页，星期六，2024年，5月三、白细胞精子症的检测精液白细胞数1×106/ml，可诊断为白细胞精子症白细胞可通过吞噬作用、产生活性氧（ROS）、分泌一些细胞因子等途径使精子损伤。精液中粒细胞为产生ROS的主要细胞。第25页,共52页，星期六，2024年，5月精液中白细胞的检测方法；1、对ROS的检测：依赖鲁米诺的化学发光分析法2、直接镜检法3、瑞-姬染色或巴氏染色法染色4、过氧化物酶染色法（正甲苯胺兰、联苯胺及邻甲苯胺过氧化物酶染色）5、荧光原位杂交法6、免疫细胞化学法CD45，CD4，CD87、弹性蛋白酶、IL-8及溶菌酶测定第26页,共52页，星期六，2024年，5月四、免疫性不育的检测检测方法很多，3种类别的抗精子抗体均可测，检测的抗精子抗体为总的或各种类别的抗精子膜抗原的抗体，而精子膜与人体其他器官组织的细胞膜有许多共同抗原，因而这种抗原抗体反应的特异性不高。如果用针对精子或睾丸特异性抗原，或针对与透明带识别和结合有关的抗原作为包被抗原来检测AsAb，其临床意义就会很大。Naz等用现代分子生物学技术确定，受精抗原FA-1和YLP（12）具有此特性，并且它们的抗体存在于不育男性的精浆和血清中建立这种特异性诊断方法是今后取代总AsAb检测的唯一途径。第27页,共52页，星期六，2024年，5月五、生殖道感染的检测大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌、绿脓杆菌、淋球菌、肺炎克雷伯氏菌、结核杆菌、衣原体、支原体、单纯疱疹病毒、人乳头瘤病毒、腺相关病毒、阴道毛滴虫等皆可感染生殖道，而且可致不育。各种细菌感染，往往通过菌体本身及其释放出的毒素、酶类等影响精子质量病毒的感染更为隐蔽临床实验室多用ELISA法检测各种病毒的抗体，通过抗体的分型可粗略判断病毒的感染时期第28页,共52页，星期六，2024年，5月衣原体和支原体感染被认为是最常见的性传播疾病（STD）病原与男性不育密切相关的衣原体为沙眼衣原体（CT），其可引起急性附睾炎和慢性前列腺炎等。目前，检测沙眼衣原体感染的方法主要有金标法、ELISA法及培养法，尤以ELISA法最为常用与男性不育密切相关的支原体为解脲支原体临床实验室多采用培养法检测。第29页,共52页，星期六，2024年，5月六、精浆生化的检测精浆中的一些生化标志可反映男性附属性腺、附睾及睾丸生精功能等，有利于综合评价不育的发病原因和机制。例如，柠檬酸、锌