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WT1基因在急性白血病患者中的表达及临床意义

目的：探讨急性白血病患者中WT1基因的表达及临床意义。方法：选取

2013年1月-2014年1月笔者所在医院收治的急性白血病患者100例，检测其

WT1基因，并完成短期随访，就该基因与病程的相关性与在各型白血病患者中

表达差异展开分析。结果：WT1在AML、ALL患者中表达均居较高水平，AML

阳性表达率为76.9%（50/65），ALL阳性率表达为88.6%（31/35），差异无统计

学意义（P0.05）。M1型AMLWT1表达居最高水平，M3型相对较低，WT1表

达与预后有密切关联。结论：本次研究AL患者中WT1的高表达再次证实，其

与疾病发生、发展关联密切，可作为对白血病治疗效果评估、复发预测、预后估

计的有效指标。

标签：WT1基因；急性白血病；表达

WT1基因于人类染色体1lp13定位，编码产物为转录因子，在运用分子遗传

学原理研究遗传性肾胚胎肿瘤时发现，对肿瘤病程发展有直接影响[1]。其表达

以在胚胎发生过程中为主，在泌尿生殖系统发育中作用明显，其在成人正常的造

血细胞和脾脏、肾脏、睾丸、子宫内膜、卵巢中表达较少，但在白血病细胞中，

表达居较高水平，直接参与白血病细胞的分化、增殖，影响疾病进展及预后，故

与急性白血病（AL）关联密切[1]。将WT1的cDNA在NIH3T3细胞中微注射，

对细胞从G0或G1中期转入S期有阻止作用，故将WT1基因定位为肿瘤抑制因

子[2]。AL属恶性造血干细胞克隆性疾病，骨髓中异常的幼稚细胞（白血病细胞）

及原始细胞在发病时大量增殖，并向肝、淋巴结、脾等各种脏器广泛浸润，对正

常造血功能产生抑制。以浸润、贫血、感染、出血等征象为主要表现[3]。在人

类大部分AL细胞中，WT1基因表现为异常高表达，表明AL病程与WT1基因

有密切相关性。本研究选取相关病例，检测WT1基因，就其在各型白血病患者

中的表达差异及与病程的关系展开探讨，现将结果报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2013年1月-2014年1月笔者所在医院收治的急性白血病患者100例，

男58例，女42例，年龄5～75岁，平均（45.2±2.1）岁。所有患者均经免疫分

型、血象检查、染色体检查、组织化学染色、骨髓象检查确诊，部分行融合基因

检测。依据《血液病诊断及疗效标准》分型，其中急性髓细胞性白血病（AML）

65例，其中M1型3例，M2型17例，M3型28例，M4型10例，M5型7例；

急性淋巴细胞白血病（ALL）35例。患者均自愿签署本次实验知情同意书，并

排除机体其他系统严重疾患者。

1.2方法

（1）试剂：准备淋巴细胞分离液、荧光定量PCR反转录反应体系。（2）单

个核细胞RNA提取：取外周血5ml或骨髓血3ml，给予肝素应用行抗凝操作，

取0.9%气化钠溶液5ml稀释，严格无菌操作，铺于淋巴细胞5ml分离液上，设

置为2000×g，保持15min离心，将白膜层轻柔吸取，于另一离心管置入，用等

渗PBS行2次洗涤，1500×g，保持10min离心，将上清液弃除，于-80℃保存沉

淀物，以对RNA提取。总RNA提取方法参照说明书进行，RNA量及估计纯度

用紫外线分光光度仪测定[4-5]。（3）PCR扩增WT1基因：采用由中国科学院合

成的WT1基因引物，扩增产物为481bp，内参基因用β-actin，过增产物为240bp。

取反转录反应体系应用，取1μgPNA在5×缓冲液5μl中加入，dNTP（10mmol/L）

4种混合液共0.5μl，加双蒸水使总体积达25μl。完成PCR的扩增后，将PCR

产物取5.0μl，加入1.3%琼脂糖凝胶中实施电泳操作，后结果用GDS8000凝胶

成像分析仪分析。

1.3观察指标

随访1年，依据患者WT1基因定量、骨髓、外周血等指标，对病情状态进

行评估[6-7]。

1.4统计学处理

所得数据采用SPSS13.0统计学软件进行处理，计数资料采用字2检验，P

＜0.