病毒抗原与抗体检测技术.ppt

固定病毒稀释血清法距离比例＝（50%—小于50%的CPE阳性率）/（大于50%的CPE阳性率－小于50%的CPE阳性率）＝（50－20）/（80－20）＝0.550%血清中和终点的范围:1:32与1:64之间。中和终点浓度=小于50%的CPE阳性率血清稀释度的对数+距离比例×稀释系数的对数=lg10-1.5+0.5×lg0.5=-1.65,其反对数是1/45即50%血清中和终点为1:45含义：1:45稀释度的恢复期血清可保护50%细胞不产生细胞病变效应。第62页,共79页，星期六，2024年，5月二、血凝/血抑血凝HA第63页,共79页，星期六，2024年，5月血凝抑制HI第64页,共79页，星期六，2024年，5月123456789101112血凝试验HA试验方法选择96孔板（V型）病毒液倍比稀释稀释好后加鸡红细胞混匀后±20℃室温静置30min+50μlPBS吸出一半1:21:221:231:24+100μl病毒液+50μl鸡红细胞吸弃一半第65页,共79页，星期六，2024年，5月血凝试验HA血凝滴度：以出现++的稀释度的倒数为判定终点,为1个血凝单位。凝集效价：能使血球产生++凝集的病毒最高稀释度为病毒的凝集效价，即0.5ml病毒液含1个血凝单位。第66页,共79页，星期六，2024年，5月三、补体结合试验补体：正常人和动物血清与组织液中的一组经活化后具有酶活性的蛋白质，辅助抗体介导免疫溶菌和溶血作用。对热不稳定。绵羊红细胞与抗绵羊红细胞抗体（溶血素）作用形成溶血素致敏的绵羊红细胞。补体可使这种致敏红细胞溶解。补体可结合任何病毒抗原抗体复合物第67页,共79页，星期六，2024年，5月三、补体结合试验如果反应系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反应后可结合补体；再加入指示系统时，而不出现溶血，是为补体结合试验阳性。如果反应系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合试验阴性。第68页,共79页，星期六，2024年，5月三、补体结合试验有3个系统：①反应系统，即已知的抗原（或抗体）与待测的抗体（或抗原）；②补体系统；③指示系统，即SRBC与相应溶血素，形成致敏红细胞。第69页,共79页，星期六，2024年，5月三、补体结合试验病毒抗原从组织培养、鸡胚和动物试验中获得病毒抗原应适当提纯，纯度愈高，特异性愈强如使用粗制抗原时，须经同样处理的正常组织作抗原对照，以识别待检血清中可能存在的、对正常组织成分的非特异性反应

第70页,共79页，星期六，2024年，5月三、补体结合试验抗体免疫用的病毒抗原最好不是同一细胞或动物，以免发生交叉反应血清样品应加热灭活处理，消除补体活性和非特异性抗补体活性人和豚鼠灭活温度为56℃；家兔和马灭活温度为65℃第71页,共79页，星期六，2024年，5月三、补体结合试验补体检测人和哺乳动物血清应用豚鼠新鲜血清补体临用前使用1％SRBC制备绵羊颈静脉采血，生理盐水洗涤溶血素用绵羊红细胞免疫家兔获得效价达到1:4000可获得56℃30分钟灭活，加甘油后长期保存稀释液含钙镁离子的生理盐水，可维持补体的稳定第72页,共79页，星期六，2024年，5月三、补体结合试验溶血素的滴定先将溶血素稀释成1:100~1:1000,再依次加入溶血素0.1ml，钙镁盐水0.2ml，1:60补体0.2ml、1％绵羊红细胞0.1ml，混匀后再水浴结果判定：完全溶血的试管液体红色透明，离心后见少许细胞;不溶血的试管液体混浊，放置后见红细胞沉淀，上清无色透明溶血素效价的测定;以完全溶血的最高稀释倍数确定为1个单位本例1个单位的溶血素的效价为1：4000；正式使用2个单位第73页,共79页，星期六，2024年，5月三、补体结合试验补体的滴定补体不稳定，每次试验前需滴定管号1：60补体钙镁盐水（ml)2U抗原(ml)1％致敏SRBC(ml)结果10.040.260.10.2不溶20.060.240.10.2不溶30.080.220.10.2微溶40.100.200.10.2微溶50.120.180.10.2全溶60.140.160.10.2全溶70.140.140.10.2全溶第74页,共79页，星期六，2024年，5月三、补体结合试验确实单位（e