一种高活性凝血因子XI突变体Ala570Thr[发明专利] .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN112126636A

(43)申请公布日2020.12.25

(21)申请号202010941171.X

(22)申请日2020.09.09

(71)申请人上海交通大学医学院附属瑞金医院

地址200025上海市黄浦区瑞金二路197号

申请人武文漫王学锋丁秋兰

(72)发明人武文漫王学锋丁秋兰

(74)专利代理机构上海泰能知识产权代理事务

所(普通合伙)31233

代理人魏峯宋缨

(51)Int.Cl.

C12N9/64(2006.01)

C12N15/57(2006.01)

A61K38/48(2006.01)

A61P7/04(2006.01)

权利要求书1页说明书5页

序列表7页附图10页

(54)发明名称

一种高活性凝血因子XI突变体Ala570Thr

(57)摘要

本发明涉及一种高活性凝血因子XI突变体

Ala570Thr(A570T)，核苷酸序列如SEQIDNO:1‑

4，氨基酸序列如SEQIDNO:5所示。本发明在由

酶原状态活化成为具有活性的酶后对其生理抑

制物产生抵抗，因此具有很高的凝血活性，对非

生理性底物具有更强的催化能力，应用于出血性

疾病的治疗，具有很好的基因治疗、基因编辑与

重组蛋白替代治疗前景。

A

6

3

6

6

2

1

2

1

1

N

C

权利要求书

CN112126636A1/1页

1.一种高活性凝血因子XI突变体Ala570Thr，其特征在于：

(1)核苷酸序列如SEQIDNO:1所示；

或(2)核苷酸序列如SEQIDNO:2所示；

或(3)核苷酸序列如SEQIDNO:3所示；

或(4)核苷酸序列如SEQIDNO:4所示；

或是任意其他核苷酸在1708位、1709位和1710位突变的组合。

2.一种如权利要求1所述的高活性凝血因子XI突变体Ala570Thr的突变蛋白，其特征在

于：氨基酸序列如SEQIDNO:5所示，该突变体位于570的氨基酸为Thr而非人野生型FXI的

Ala；或是任意其他氨基酸在该位点的改变。

3.编码如权利要求2中所述的突变蛋白的核酸，或与所述编码核酸长度相同且与所述

编码核酸完全互补的核酸。

4.一种表达如权利要求2中所述的突变蛋白的载体。

5.一种高活性凝血因子XI突变体Ala570Thr的突变蛋白的制备方法，包括如下步骤：

(1)将如权利要求1所述的高活性凝血因子XI突变体Ala570Thr的编码基因连入载体

中，得到重组载体；

(2)将上述重组载体转化宿主细胞，得到表达重组凝血因子XIAla570Thr突变细胞克

隆；

(3)于无血清培养基中连续灌流培养上述重组细胞克隆，诱导重组凝血因子XI

Ala570Thr的突变蛋白的表达；

(4)分离纯化、过滤，最后灌装、冻干，得到所表达的高活性凝血因子XIAla570Thr突变

蛋白。

6.一种高活性凝血因子XI突变体Ala570Thr的突变蛋白及其编码核酸序列的应用，其

特征在于：应用权利要求1或3所述的核苷酸序列于制备基因治疗药物，包括将其与启动子

和/或终止序列连接，构建表达质粒，基因治疗病毒或非病毒载体，表达权利要求2中的高活

性凝血因子XI蛋白。