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TNF-α诱导SD大鼠胰岛细胞凋亡的研究

王功玲

【摘要】目的体外观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对SD大鼠胰岛细胞凋亡的影响.

方法体外获得的SD大鼠胰岛细胞,用不同浓度TNF-α(分别为0、10、30、50

ng/ml)处理24小时.应用脱氧核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检

测胰岛细胞凋亡率;应用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胰岛细胞Bcl-

2和BaxmRNA表达水平的变化.结果10ng/mlTNF-α组胰岛细胞凋亡数与对照

组比较无显著差异(P＞0.05),30ng/ml和50ng/mlTNF-α组胰岛细胞凋亡数与

对照组比较显著增加(P均＜0.05).10ng/mlTNF-α能增加Bcl-2mRNA表达水

平,而30ng/ml和50ng/mlTNF-α能显著降低Bcl-2mRNA表达水平.10

ng/ml、30ng/ml及50ng/mlTNF-α均能使BaxmRNA表达水平增加.结论

TNF-α可呈浓度依赖性诱导体外培养的胰岛细胞凋亡,其机制可能与诱导Bax、抑

制Bcl-2有关.

【期刊名称】《泰山医学院学报》

【年(卷),期】2013(034)010

【总页数】4页(P744-747)

【关键词】肿瘤坏死因子-α;胰岛细胞;凋亡;Bcl-2;Bax

【作者】王功玲

【作者单位】泰山医学院附属泰山医院内分泌二科,山东泰安271000

【正文语种】中文

【中图分类】R587

糖尿病(DM)是以慢性血糖升高为特点的代谢性疾病，伴有蛋白质及脂肪的代谢紊

乱，久之可引起肾脏、眼、神经等组织严重的并发症。临床类型主要分为1型糖

尿病(T1DM)和2型糖尿病(T2DM)，T2DM以外周胰岛素抵抗、胰岛β细胞功能

失调及其数量的减少为特征[1]，而T1DM中，由于自身免疫导致巨噬细胞和T细

胞浸润胰岛组织并分泌一些细胞因子，如IL-1β、TNF-α和IFN-γ等，可诱导β

细胞凋亡，从而导致β细胞进行性减少[2]。近年来，TNF-α在糖尿病的发病机制

越来越受到人们的重视，它是由激活的单核巨噬细胞和脂肪细胞分泌的一种细胞因

子，研究[3]表明，它与糖尿病视网膜病变、胰岛素抵抗及β细胞凋亡都有重要的

关系。本课题利用体外细胞培养，观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对SD大鼠胰岛细

胞凋亡的影响并探讨其机制。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1试剂TNF-α为PeoroTechEc产品，胶原酶P为ROCHE产品，RPMI1640

培养基为GIBCO产品，FICOLL-为Pharmacia产品。Trizol试剂为Promega产

品。逆转录聚合酶链式反应试剂盒为Fermentas产品。高保真PCR扩增试剂盒为

上海生工生物工程有限公司产品。100bpDNALadder为Fermentas产品。

Bcl-2和Bax引物为invitrogen产品。

1.1.2实验动物从泰山医学院动物实验研究室购买50只体重约200～250g成年

雄性SD大鼠。

1.2方法

1.2.1大鼠胰岛细胞分离与培养按董维平[4]法提取胰岛细胞。成年SD大鼠，经臀

大肌注射1%戊巴比妥钠麻醉。消毒，剖腹，经胆总管原位插管，注入预温的1%

胶原酶P溶液(含7.5mmol/L，hepes10mmol/L，pH7.8)8ml，分离已膨胀的

胰腺，38℃震荡消化10min，于冰Hanks液中撕碎，使呈细砂状，20目不锈钢

网丝过筛，加入冰Hanks液(含10%小牛血清)终止消化，4℃1000r/min离心3

min，弃上清，同法洗二次，沉淀加25%Ficoll4ml混匀，依次加入23%、20%、

11%Ficoll各2ml和Hanks液2ml，4℃3000r/min离心20min，吸出

23%～20%，20%～11%界面的胰岛，经Hanks液洗三次，加