miR-760靶向c-Myc对人食管鳞状细胞癌TE-10细胞生物学特性的影响.pdfVIP

miR-760靶向c-Myc对人食管鳞状细胞癌TE-10细胞生物

学特性的影响

杨雪涛;王小文;吴庆琛

【期刊名称】《《上海交通大学学报（医学版）》》

【年(卷),期】2019(039)011

【总页数】9页(P1268-1276)

【关键词】miR-760;食管鳞状细胞癌;c-Myc;靶基因

【作者】杨雪涛;王小文;吴庆琛

【作者单位】重庆医科大学附属第一医院胸心外科重庆400016

【正文语种】中文

【中图分类】R655.4;R735.1;Q279

食管癌，包括食管鳞状细胞癌（esophagealsquamouscellcarcinoma，ESCC）

和食管腺癌（esophagealadenocacinoma，EAC），是世界上第八大常见的

人类恶性肿瘤，也是癌症致死的第六大原因，在非洲和东南亚国家尤其是中国的发

生率较高[1]。食管癌的主要治疗方法包括手术治疗以及手术联合放射治疗（放疗）

和化学治疗（化疗），但存在预后不良和5年生存率较低的情况[2]。

miRNA是一类内源性表达的短链非编码小RNA，可通过与靶基因3非翻译区

（3UTR）序列中的互补位点相互作用来调控其转录后沉默，从而调节增殖、分化、

凋亡、代谢、免疫和肿瘤起始等多种生物学进程[3-4]。尽管已确认的人类miRNA

的数量不断增加，但仅有少数miRNA在病理生理方面的功能和机制得到了描述。

已发现在多种人类恶性肿瘤中miR-760的表达水平下调，包括结直肠癌、非小细

胞肺癌、胃癌和乳腺癌等[5-8]。然而，miR-760在ESCC中的作用机制仍未见报

道。

c-Myc基因是MYC（MYCproto-oncogene，BHLHtranscriptionfactor）家

族的成员之一，主要通过扩增和染色体易位重排的方式激活，可以通过驱动细胞分

裂、无限增殖和细胞永生化来促进肿瘤的发生、发展[9-10]。据调查，20%的人类

恶性肿瘤，包括乳腺癌、结肠癌、宫颈癌、骨肉瘤和小细胞肺癌等，均与c-Myc

的异常表达有关[9-12]。本研究拟分析miR-760在ESCCTE-10细胞增殖、凋亡、

迁移和侵袭中的作用及潜在的分子机制。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1临床组织标本和细胞株收集2017—2018年于重庆医科大学附属第一医院

接受食管癌根治术的14例ESCC患者的癌组织及癌旁组织（正常食管组织或距离

癌组织≥5cm）。患者术前均未接受化疗或放疗。标本收集后立即液氮快速冷冻，

并储存在-80℃冰箱。所有患者或监护人均签署知情同意书。研究获得重庆医科大

学附属第一医院伦理委员会的批准。人ESCC细胞株TE-10、Eca109、KYSE510、

KYSE150和EC9706以及正常人食管鳞状上皮细胞Het-1A由重庆市分子肿瘤学

和表观遗传学重点实验室提供。

1.1.2试剂和仪器RPMI-1640培养基购于Hyclone公司（美国），胎牛血清购于

PANBiotech公司（德国），青霉素、链霉素、胰酶和嘌呤霉素购于Gibco公司

（美国），SanPrep柱式microRNA提取试剂盒购于生工生物工程（上海）股份

有限公司，All-in-OneTM第一链cDNA合成试剂盒和All-in-OneTMmiRNA

qRT-PCR检测试剂盒购于GeneCopoeia公司（美国），TRIzol试剂、

PrimeScriptTMRT试剂盒和SYBRPremixExTaqTMⅡ（TliRNaseHPlus）试

剂盒购于TaKaRa公司（日本），Lipofectamine2000转染试剂购于Invitrogen

公司（美国），miR-760的模拟物（miR-mimics）、抑制剂（miR-inhibitor）、

模拟物阴性对照（mimics-NC）、抑制剂阴性对照（inhibitor-NC）及GP-

miRGLO质粒载体[c-Myc-WT（c-Myc野生型质粒）、c-Myc-MUT