包埋-交联磷脂酶A .pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN102776065A

(43)申请公布日2012.11.14

(21)申请号CN201210256605.8

(22)申请日2012.07.24

(71)申请人东北农业大学

地址150030黑龙江省哈尔滨市香坊区木材街59号

(72)发明人于殿宇江连洲胡立志王立琦周晓丹张春艳宋云花刘鑫邹小雨李万振宋鹏

王玥

(74)专利代理机构

代理人

(51)Int.CI

C11B3/00

C11B3/04

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

包埋-交联磷脂酶A

(57)摘要

包埋-交联磷脂酶A

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.包埋-交联磷脂酶Asub1/sub聚集体用于大豆毛油脱胶的方法，其特征在于用

包埋-交联磷脂酶Asub1/sub聚集体对大豆毛油进行脱胶通过以下步骤实现：

一、包埋-交联磷脂酶Asub1/sub聚集体的制备：将1mL酶加入到pH值为5.0

的磷酸二氢钠与柠檬酸缓冲液中，调节酶液浓度为0.02～0.07g/mL，在0℃下缓慢

加入饱和度为65～90%的乙醇，在pH为3～8的条件下进行沉淀反应时间30min，

持续搅拌，从而保证酶聚集体颗粒均匀，然后于10000r/min离心，收集沉淀；交

联磷脂酶Asub1/sub聚集体的制备及包埋过程：向聚集体悬浮液中加入体积浓

度为0.2%戊二醛，搅拌进行交联反应4h，离心去除上清液，用缓冲液冲洗交联酶

聚集体数次，直到洗液中检测不到任何的活力，收集沉淀用磷酸盐缓冲液悬浮；在

质量浓度1%的20mL海藻酸钠溶液中加入上述酶聚集体1mL，搅拌均匀，静止

5min后，用灭菌后的5mL注射器吸入上述混合液，以约5滴/s注入浓度0.1～

0.35mol/L的CaClsub2/sub溶液中制成微胶囊，将形成的微胶囊在4℃的

CaClsub2/sub溶液中放置一段时间使其进一步硬化；然后抽滤得到硬化的微胶

囊，用无菌生理盐水洗涤3～5次，以洗去表面的CaClsub2/sub，然后进行冷

冻干燥，得到包埋-交联磷脂酶Asub1/sub聚集体；二、取大豆毛油先经水化

脱胶法去除大豆毛油中的水化磷脂，然后向经过处理的大豆毛油中加入质量浓度为

35～50%、质量为大豆毛油0.5～2%的柠檬酸溶液并以500～1500r/min的速度搅拌

5～20min，再向经过处理的大豆毛油中添加质量浓度为4%的NaOH溶液并不断进

行搅拌直至大豆毛油的pH值在4.0～6.0之间停止添加NaOH溶液；三、在40～60℃

条件下向调整好pH值的大豆毛油中加入为调整好pH值的大豆毛油质量的0.1～

0.5%的包埋-交联磷脂酶Asub1/sub聚集体；四、对加入包埋-交联磷脂酶

Asub1/sub聚集体的大豆毛油以50～100r/min的速度搅拌1～10h，然后对加入

包埋-交联磷脂酶Asub1/sub聚集体的大豆毛油以5000～8000r/min的速度离心

1～5min，去除重相中的杂质，即实现用包埋-交联磷脂酶Asub1/sub聚集体对

大豆毛油进行脱胶的工艺。

2.根据权利要求1所述的用包埋-交联磷脂酶Asub1/sub聚集体对大豆毛油进行

脱胶，其特征在于步骤二中向经过处理的大豆毛油中加入质量浓度为40～45%、

质量为大豆毛油1～1.8%的柠檬酸溶液并以600～1200r/min的速度搅拌7～15min。

3.根据权利要求1所述的用包埋-交联磷脂酶Asub1/sub聚集体对大豆毛油进行

脱胶，其特征在于步骤二中向经过处理的大豆毛油中加入质量浓度为45%、质量

为大豆毛油1.5%的柠檬酸溶液并以1000r/min的速度搅拌12min。

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