TALEN介导的MYH9基因沉默及对细胞周期与凋亡的影响 .pdfVIP

TALEN介导的MYH9基因沉默及对细胞周期与凋亡的影响

朱显军;邓海军;叶耿泰;沈智勇;李风萍;郭伟洪;杨庆斌;刘浩;李国新

【摘要】目的：利用TALEN技术敲除人胃癌细胞系MGC803细胞株MYH9基

因，观察MYH9基因沉默后细胞周期及凋亡改变。方法根据斯丹赛FastTALETM

TALEN试剂盒说明书，设计并构建靶向MYH9基因的TALEN质粒对。通过质粒

转染、DNA测序、RT-PCR和Westernblot等检测质粒活性，成功挑取MYH9

基因敲低单克隆株，并对构建好的细胞株进行周期和凋亡检测。结果成功挑选的

MGC803单克隆细胞株未检测到MYH9基因完全敲除；MYH9基因敲低后，

MGC803细胞周期受阻于G2/M期（P0.05），早期凋亡增加（P0.05）。结

论利用TALEN技术成功构建MGC803细胞MYH9基因敲低单克隆株，该模型有

助于后期深入探讨胃癌MYH9基因功能。%ObjectiveToconstructaMYH9

geneknockoutmodelinMGC803celllineusingtranscriptionactivator-like

effectornuclease(TALEN)andobserveitseffectoncellcycleand

apoptosis.MethodsAccordingtoFastTALETMTALENKit,wedesigned

TALENpairsandconstructedtheplasmidstargetingtoMYH9gene.After

detectingtheiractivityinMGC803cellsbyplasmidtransfection,DNA

sequencing,RT-PCRandwesternblot,weselectedthemonoclonalcells

andstudiedthechangesinthecellcycleandapoptosis.ResultsMYH9

genecouldnotbeknockedoutbutknockeddowninselectedMGC803

monoclonalcells,whichcausedcellcyclearrestedatG2/Mphase(P0.05)

andasignificantincreaseinthecellnumberwithearlyapoptosis(P0.01).

ConclusionWesuccessfullygeneratedaMYH9knockdownmodelin

MGC803celllinesbyTALEN,whichcouldbeinfavorofMYH9function

studyingastriccancer.

【期刊名称】《南方医科大学学报》

【年(卷),期】2016(036)003

【总页数】6页(P375-380)

【关键词】TALEN技术;MYH9;细胞周期;细胞凋亡

【作者】朱显军;邓海军;叶耿泰;沈智勇;李风萍;郭伟洪;杨庆斌;刘浩;李国新

【作者单位】南方医科大学南方医院普外科，广东广州510515;南方医科大学南

方医院普外科，广东广州510515;南方医科大学南方医院普外科，广东广州

510515;南方医科大学南方医院普外科，广东广州510515;南方医科大学南方医

院普外科，广东广州510515;南方医科大学南方医院普外科，广东广州510515;

南方医科大学南方医院普外科，广东广州510515;南方医科大学南方医院普外科，

广东广州510515;南方医科大学南方医院普外科，广东广州510515

【正文语种】中文

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胃癌是全世界常