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NCLX介导的线粒体钙稳态对肝癌细胞生长的影响

JinMingpeng;YinChun;ShangYingying;CaoHaiyan;JiXiaoying;Ren

Tingting;XingJinliang;WuYousheng

【摘要】目的探讨线粒体钠钙交换体(mitochondrial

Na+/Ca2+exchanger,NCLX)介导的线粒体钙稳态对肝癌细胞生长的影响.方法真

核表达载体pSliencer3.0-shNCLX、pcDNA3.1(+)-NCLX分别转染肝癌细胞

SNU-739和SNU-368,构建稳定干涉和过表达NCLX肝癌细胞.采用免疫印迹法检

测转染后肝癌细胞中NCLX蛋白的表达,Rhod-2-AM染色检测肝癌细胞线粒体钙

水平,MTS和EdU实验检测肝癌细胞增殖能力,流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡情况.

结果免疫印迹法检测结果显示成功构建干涉和过表达NCLX的SNU-739和

SNU-368肝癌细胞.与转染空载体肝癌细胞比较,干涉NCLX后肝癌细胞SNU-739

和SNU-368线粒体钙明显增多(P＜0.01),细胞增殖率明显升高(P＜0.05),细胞凋亡

率明显下降(P＜0.01);而过表达NCLX后肝癌细胞SNU-739和SNU-368线粒体

钙明显减少(P＜0.05),细胞增殖率明显下降(P＜0.05),细胞凋亡率明显上升(P＜

0.01).结论干涉NCLX诱导的线粒体钙水平升高可促进肝癌细胞增殖和抑制凋亡,

而过表达NCLX诱导的线粒体钙水平下降抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡,NCLX可

能是肝癌的潜在治疗靶点.

【期刊名称】《中国癌症防治杂志》

【年(卷),期】2018(010)006

【总页数】7页(P420-426)

【关键词】肝肿瘤;钠钙交换体;线粒体钙;增殖;凋亡;治疗靶点

【作者】JinMingpeng;YinChun;ShangYingying;CaoHaiyan;Ji

Xiaoying;RenTingting;XingJinliang;WuYousheng

【作者单位】

【正文语种】中文

【中图分类】R735.7

肝癌是目前全世界第6大常见癌症，也是全球癌症第4大死亡原因，每年约有

841000例新发病例和782000例死亡病例［1］。我国是肝癌高发区，近年来肝

癌在我国的发病率和死亡率呈逐年上升趋势［2］，严重威胁人民健康。线粒体通

过调节细胞代谢等功能在癌症的发生发展中扮演重要角色。研究证实线粒体结构和

功能改变在促进癌症发展中发挥重要作用［3］。在线粒体众多功能中，肿瘤细胞

线粒体钙稳态的变化备受关注［4］。钙离子可调节细胞增殖、分化和凋亡等。已

有研究表明，一些肿瘤细胞存在特定的Ca2+通道、泵或交换剂被上调或下调［5-

6］。线粒体钠钙交换体（mitochondrialNa+/Ca2+exchanger，NCLX）是线

粒体钙流出的通道，在调控线粒体钙稳态中发挥重要作用［7］。上述结果提示

NCLX表达可能与肝癌的发生发展密切相关，有可能成为肿瘤治疗的潜在靶点，但

目前国内外尚未有关NCLX与肝癌关系的深入研究。本研究通过构建干涉和过表

达NCLX的稳定转染肝癌细胞系，观察NCLX介导的线粒体钙稳态在肝癌细胞增

殖和凋亡中的作用，初步探索线粒体钙对肝癌细胞生长的影响，为寻找肝癌的潜在

治疗靶点提供证据。

1材料与方法

1.1主要试剂与仪器

肝癌细胞系SNU-739和SNU-368购自上海中科院细胞库。NCLX扩增引物由上

海生工合成，pcDNA3.1（+）载体、pSilencer3.0载体、脂质体

（Lipofectamine2000）、Rhod-2-AM、PVDF膜、胎牛血清（FBS）、RPMI

1640培养基购自美国Invitrogen公司，限制性核酸内切酶HindⅢ、BamHⅠ、

T4DNA连接酶、DNAmarkerDL2000、DH5a感受态细菌菌株购自日本

TaKaRa公司，细胞培养瓶购自美国Co