原发性肝癌组织线粒体DNA含量检测及意义 .pdfVIP

原发性肝癌组织线粒体DNA含量检测及意义

孙玉;曲红梅;张洪海;张彤;吴昊;陈德喜

【摘要】目的检测原发性肝癌及其癌旁组织中线粒体DNA含量,探讨线粒体

DNA含量变化与肝癌发生的关系.方法荧光实时定量聚合酶链反应(real-timePCR)

法扩增22例肝癌及相应癌旁组织中线粒体DNA编码基因细胞色素C氧化酶

Ⅱ(COⅡ),以核编码基因磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为内参照,比较两种组织中线

粒体DNA含量的差异.结果肝癌组织中线粒体DNA相对含量为156.54±107.54,

癌旁组织线粒体DNA相对含量为290.24±187.37,差异有统计学意义(P0.01).结

论肝癌组织线粒体DNA的含量与肝癌发生有密切关系,有望成为一种新的肝癌标

志物.

【期刊名称】《临床荟萃》

【年(卷),期】2010(025)001

【总页数】4页(P33-36)

【关键词】癌;肝细胞;DNA;线粒体;聚合酶链反应

【作者】孙玉;曲红梅;张洪海;张彤;吴昊;陈德喜

【作者单位】首都医科大学附属北京佑安医院性病艾滋病实验室,北京100069;潍

坊市人民医院消化内科,山东潍坊261041;首都医科大学附属北京佑安医院性病艾

滋病实验室,北京100069;首都医科大学附属北京佑安医院性病艾滋病实验室,北京

100069;首都医科大学附属北京佑安医院性病艾滋病实验室,北京100069;首都医

科大学附属北京佑安医院性病艾滋病实验室,北京100069

【正文语种】中文

【中图分类】R735.7

从上个世纪90年代起原发性肝癌的发病率已越居我国各种肿瘤的第二位,其中又以

肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)居多。HCC的发病原因,目前认为与乙

型肝炎病毒(HBV)感染、丙型肝炎病毒(HCV)感染、黄曲霉素、酒精、遗传等诸多

因素有关,但具体机制不明[1]。近年来,线粒体DNA与肿瘤的关系逐渐引起人们的

关注。线粒体是真核细胞内唯一具有核外基因组的细胞器。与核基因组相比,线粒

体DNA相对分子质量小,处在高活性氧自由基的特殊环境中,缺乏组蛋白保护及有

效的损伤修复系统,是致癌物的重要靶点,极易发生各种突变,进而影响其复制速度并

改变其含量[2]。国外部分学者研究发现肝癌组织存在线粒体DNA的缺失[3],并认

为其与肿瘤发生有关,而国内未见类似报道。本研究采用敏感的荧光实时定量聚合

酶链反应(PCR)法检测肝癌及其癌旁组织中线粒体DNA的含量,探讨线粒体DNA

数量的变化与肝癌发生的关系,期望为临床诊断提供新的指标。

1资料与方法

1.1病例选择收集首都医科大学附属北京佑安医院2008年8月至2009年4月原

发性肝癌手术切除标本,手术切除后半小时内立即置于-135℃冰箱保存待用。癌组

织和癌旁组织各22例,其中男14例,女8例,男∶女=1.75∶1。年龄28～68岁,平

均(51.3±12.0)岁。所有肝癌患者术前均未接受任何放射治疗和化学治疗。所选标

本均经病理确诊为HCC。

1.2方法

1.2.1主要试剂与仪器DNA提取试剂盒购自德国QIAGEN公司。美国应用生物公

司ABI7900HT型RT-PCR仪,运行软件和分析软件为SequenceDetection

System(SDS)(ABI公司,版本号2.3)、SDSRQManager(ABI公司,版本号1.2)。

PCR引物及探针由美国Invitrogen公司合成。

1.2.2肝癌组织DNA提取按照QIAGENDNA提取试剂盒说明书进行。

1.2.3线粒体DNA含量检测本研究采用相对定量PCR法,以线粒体编码基因细胞

色素C氧化酶Ⅱ(cytochromeCoxidaseⅡ,COⅡ)的拷贝数作为线粒体DNA