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TNFα激活NF-κB促进宫颈癌细胞的侵袭

张丽瑞;李旭;王月玲;李琛

【摘要】目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNFα)对人宫颈癌细胞HeLa侵袭能力的影响

及其分子机制.方法5ng/mLTNFα处理HeLa细胞,体外侵袭转移实验观察TNFα

诱导后细胞的侵袭能力;免疫荧光及蛋白印迹观察核转录因子-κBp65(NF-κBp65)

的定位及表达,蛋白印迹法检测基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达;使用NF-κB通路

抑制剂Bay11-7082(2.5μmol/L)处理24h后TNFα(5ng/mL)诱导细胞,观察细胞

侵袭能力及MMP9表达的改变.结果TNFα促进了HeLa细胞的侵袭,诱导NF-

κBp65核转位激活,上调了MMP9的表达.TNFα促进HeLa细胞的侵袭能力及

MMP9的表达可以被NF-κB抑制剂阻断.结论TNFα通过激活NF-κB信号促进了

宫颈癌细胞侵袭,暗示NF-κB可能作为抑制宫颈癌进展的重要靶点.

【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》

【年(卷),期】2013(034)005

【总页数】4页(P568-571)

【关键词】肿瘤坏死因子α;核转录因子κB;宫颈癌;侵袭;基质金属蛋白酶9

【作者】张丽瑞;李旭;王月玲;李琛

【作者单位】西安交通大学医学院第一附属医院妇产科,陕西西安,710061;西安交

通大学医学院第一附属医院医学转化中心,陕西西安,710061;西安交通大学医学院

第一附属医院妇产科,陕西西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院妇产科,

陕西西安,710061

【正文语种】中文

【中图分类】R737.33

尽管高危型人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus，HPV）感染起始了宫颈癌细

胞的恶性转化［1］，但免疫因素及肿瘤微环境在宫颈癌进展中也同样重要［2］。

肿瘤坏死因子－α（TNFα）是巨噬细胞分泌的起始免疫反应的促炎症因子。虽然

高剂量的TNFα具有细胞毒性作用，但证据表明慢性暴露于低剂量的TNFα可使

细胞获得恶性潜能［3］。TNFα可能直接促进了原癌基因的激活、DNA损伤和肿

瘤转移［4］。然而TNFα是否在宫颈癌侵袭中发挥作用仍不清楚。本研究旨在探

讨TNFα在宫颈癌侵袭中的作用及其分子机制。

1材料与方法

1.1材料Hela人宫颈癌细胞系来自西安交通大学医学院第一附属医院医学转化中

心。RPMI1640培养基及胰蛋白酶购自Hyclone公司；胎牛血清购自兰州民海公

司；TNFα购自R＆D公司；抗MMP9、NF－κBp65、HistoneH1抗体及鼠抗

β－catenin购自SantaCruz公司；HRP标记二抗购自美国Pierce公司；TRITC

标记羊抗鼠二抗购自Jackson公司；Matrigel购自BD公司；BCA蛋白浓度测定

试剂盒及ECL化学发光试剂盒购自美国Pierce公司；Transwell小室购自

Millipore公司。

1.2细胞侵袭实验将－80℃保存的Matrigel4℃过夜解冻；将100μL稀释的

Matrigel铺到Transwell的上室。37℃孵育Transwell小室至少6h；将5×104

细胞接种于上层小室，下层加入500μL含200mL／L胎牛血清的1640培养基，

培养48h，取出上层小室，PBS洗2遍，40g／L多聚甲醛固定10min，姬姆萨

染色30min；显微镜下观察，并随机计数5个视野内的细胞数。重复3次。

1.3蛋白印迹法细胞生长至对数生长期时，蛋白裂解液裂解细胞，提取细胞总蛋

白。BCA法测定蛋白浓度。SDS－PAGE凝胶电泳，用电转膜仪将凝胶中的样品

转移到硝酸纤维素膜上；脱脂牛奶室温封闭1h。将硝酸纤维素膜置于鼠抗人

MMP9（1∶200）抗体封闭液中，4℃冰箱孵育过夜；取出膜TBST漂洗3次，每

次15min，用二抗温育1.5h，于暗室中ECL曝光显影。

1.4免疫荧光实验用预冷的甲醇－20℃固定铺满细胞的盖玻片10min，TritonX

－100穿膜室温处理5min，羊血清室温封闭1h，加入PBS稀释的一