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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号CN111455006A
(43)申请公布日2020.07.28
(21)申请号202010280783.9A61K38/21(2006.01)
A61P31/16(2006.01)
(22)申请日2020.04.10
C12R1/19(2006.01)
(71)申请人天津生机集团股份有限公司
地址300384天津市西青区华苑产业园区
海泰发展二路2号
(72)发明人王连民高应瑞刘珂飞
(74)专利代理机构北京瑞盛铭杰知识产权代理
事务所(普通合伙)11617
代理人张倩
(51)Int.Cl.
C12P21/02(2006.01)
C07K1/36(2006.01)
C07K1/30(2006.01)
C07K1/16(2006.01)
C07K14/56(2006.01)权利要求书2页说明书15页
序列表1页附图2页
(54)发明名称
大肠杆菌表达的重组鸡干扰素α产品及其
制备方法与用途
(57)摘要
本发明公开了一种大肠杆菌表达的重组鸡
干扰素α产品及其制备方法与用途，属于生物技
术领域。本发明将重组大肠杆菌工程菌经过发酵
培养、向其中加入IPTG经过诱导4-6小时后结束
发酵，离心获得菌体，将所述菌体经过破碎裂解
得到鸡干扰素α蛋白包涵体，将所述鸡干扰素α
蛋白包涵体经过变性溶解，并利用镍-琼脂糖凝
胶FF层析柱进行层析纯化，之后经过蛋白复性，
并与保护剂混合同时加入注射用水稀释，经过分
装获得重组鸡干扰素α的成品，不仅实现了菌体
的高密度发酵，同时显著提高了鸡干扰素α蛋白
纯化的效果以及生物学活性。
A
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1
N
C
权利要求书
CN111455006A1/2页
1.一种大肠杆菌表达的重组鸡干扰素α产品的制备方法，其特征在于：步骤如下：
将大肠杆菌工程菌经过发酵培养、向其中加入IPTG经过诱导4-6小时后结束发酵，离心
获得菌体，将所述菌体经过破碎裂解得到重组鸡干扰素α蛋白包涵体，将所述重组鸡干扰素
α蛋白包涵体经过变性溶解，并利用镍-琼脂糖凝胶FF层析柱进行层析纯化，之后经过蛋白
复性，并与保护剂混合同时加入注射用水稀释，经分装获得重组鸡干扰素α产品；
所述蛋白复性中所用复性液组成为：精氨酸0.5M，2mMEDTA，0.8mMGSSG，50mMTris，
20％甘油，余量为水，pH7.0。
2.如权利要求1所述的一种大肠杆菌表达的重组鸡干扰素α产品的制备方法，其特征在
于：所述层析纯化中所用洗脱缓冲液组成为：6MGU-HCl，20mMtris-HCl，500mm咪唑，余量
为水，pH7.5。
3.如权利要求1所述的一种大肠杆菌表达的重组鸡干扰素α产品的制备方法，其特征在
于：所述大肠杆菌工程菌发酵培养步骤为：将所述大肠杆菌工程菌经活化后按照接种量
5％-10％接种于发酵培养基中，36.8-37.2℃条件下发酵，控制pH值6.8-7.2，通过搅拌速度
及通气量控制溶氧≥30％。
4.如权利要求2所述的一种大肠杆菌表达的重组鸡干扰素α产品的制备方法，其特征在
于：步骤如下：
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