2021炎性调控中降钙素基因相关肽的功能分析范文3 .pdfVIP

2021炎性调控中降钙素基因相关肽的功

能分析范文

摘要：目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）在炎性调控中的作用，验证

CGRP可通过活性氧簇-核苷酸结合低聚体结构域样受体3（ROS-NLRP3）信号通路抑制小

鼠巨噬细胞炎性因子的分泌。方法实验分为对照组、脂多糖（LPS）100ng/ml组

（LPS组）、CGRP10ng/ml组（CGRP10组）、CGPR30ng/ml组（CGRP30组）、CGRP100

ng/ml组（CGRP100组）和CGRP30ng/ml+LPS100ng/ml组（CGRP30+LPS组），作用12h

后，分别收集各组细胞的培养上清，免疫酶联吸附法（ELISA）检测上清液中白介素-

1β（IL-1β和）肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的蛋白表达。同时收集各组细胞，荧光

定量反转录聚合酶连锁反应（qRT-PCR）检测炎症因子IL-1β、TNF-α和炎性复合体

NLRP3mRNA的表达水平。流式细胞术检测各组细胞内ROS水平，免疫印迹法检测ROS-

NLRP3信号通路相关蛋白NLRP3、caspase-1、IL-1β和TNF-α的表达。结果与对照组

相比，LPS组细胞中IL-1β、TNF-α和NLRP3的mRNA表达水平增加，培养上清中IL-1β

和TNF-α的蛋白表达水平增加，细胞内ROS水平增加，且细胞内NLRP3、caspase-1、

IL-1β和TNF-α的蛋白表达水平也增加；与LPS组相比，CGRP10组、CGRP30组、

CGRP100组、CGRP30+LPS组细胞中IL-1β、TNF-α和NLRP3的mRNA表达水平降低，培养

上清中IL-1β和TNF-α的蛋白表达水平降低，细胞内ROS水平降低，且细胞内NLRP3、

caspase-1、IL-1β和TNF-α的蛋白表达水平也降低，且所有指标中CGRP30组降低最明

显。结论CGRP可降低巨噬细胞内ROS和NLRP3的表达，使炎性因子IL-1β和TNF-α的释

放减少，CGRP可能在降低局部炎症反应中发挥重要的调控作用。

关键词：CGRP;ROS-NLRP3;小鼠;巨噬细胞;炎性因子;

Abstract：ObjectiveToinvestigatetheroleofcalcitoningenerelated

peptide(CGRP)ininflammationregulation,andtoverifythatCGRPcan

inhibitthesecretionofinflammatorycytokinesinmousemacrophages

throughreactiveoxygenspecies-nucleotidesbindingoligomerdomainlike

receptors3(ROS-NLRP3)signalingpathway.MethodsTheexperimentwas

dividedintocontrolgroup,lipopolysaccharide(LPS)100ng/mlgroup(LPS

group),CGRP10ng/mlgroup(CGRP10group),CGPR30ng/mlgroup(CGPR30

group),CGRP100ng/ml(CGRP100group)andCGRP30ng/ml+LPS100ng/mlgroup

(CGRP30+LPSgroup).After12h,thesupernatantsofeachgroupwascollected

andtheexpressionofinterleukin-1β(IL-1β)andtumornecrosisfactor-α

(TNF-α)weredetectedbyenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA).The

cellswascollectedatthesametime,andtheexpressionlevelsofIL-

1β,TNF-αandNLRP3mRNAweredetectedbyquantitativereverse

transcriptionpolymerasechainreaction(qRT-PCR).ThelevelsofROSineach

gro