DB22T 2688.2-2017 饲料中三种致病菌检测微滴数字PCR法 第2部分：单核细胞增生李斯特氏菌　　.pdfVIP

ICS65.120

B25

备案号：56302-2017DB22

吉林省地方标准

DB22/T2688.2—2017

饲料中三种致病菌检测微滴数字PCR法

第2部分：单核细胞增生李斯特氏菌

DeterminationofthreepathogenicbacteriainfeedbydropletdigitalPCRmethod

Part2：Listeriamonocytogenes

2017-09-30发布2017-11-30实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T2688.2—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。

DB22/T2688《饲料中三种致病菌检测微滴数字PCR法》分为3个部分：

——第1部分：沙门氏菌；

——第2部分：单核细胞增生李斯特氏菌；

——第3部分：产气荚膜梭菌。

本部分为DB22/T2688的第2部分。

本部分中华人民共和国吉林出入境检验检疫局提出并归口。

本部分起草单位：中华人民共和国吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心。

本部分主要起草人：王准、聂丹丹、李文君、杨帆、王玮琳、李忠起、彭勃、罗雁非、刘金华、刘

韬。

I

DB22/T2688.2—2017

饲料中三种致病菌检测微滴数字PCR法

第2部分：单核细胞增生李斯特氏菌

警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问

题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1范围

本标准规定了饲料中单核细胞增生李斯特氏菌检测微滴数字PCR法的试剂和材料、仪器和设备、样

品、试验步骤和试验数据处理。

本标准适用于饲料中单核细胞增生李斯特氏菌检测的微滴数字PCR法。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.1食品安全国家标准食品微生物学检验总则

GB4789.30-2016食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T14699.1饲料采样

GB19489实验室生物安全通用要求

WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用

3原理

微滴式数字PCR平台通过产生微小油包水体系实现反应体系的分割。经PCR扩增后，根据泊松分布原

理及阳性微滴的个数与比例得出靶分子的起始拷贝数或浓度。本标准通针特异性引物和探针进行数字

PCR扩增，从而对饲料中单核细胞增生李斯特氏菌进行快速检测。

4试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯。实验用水应符合GB/T6682中二级水的要求。

4.1菌株：沙门氏菌阳性标准菌株。

4.22×ddPCR预混液。

4.3李氏增菌肉汤LB(LB1,LB2)见GB4789.30-2016中3.3。

4.4裂解液：2%CTAB(cetyltrithylammoniumbromide，