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BeijingSolarbioScienceTechnologyCo.,Ltd
Tel:400-968-6088
Fax:010
Http://
高效RIPA组织/细胞裂解液使用说明书
货号:R0010
规格:20ml/100ml
PMSF0.3ml/1.5ml
本产品配有一支()
保存:RIPA裂解液2-8℃保存,PMSF-20℃保存。
使用说明(仅供参考):
如发现RIPA有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
1mlRIPA10ulPMSFPMSF1mMPMSF
根据使用量,取每加入,使的最终浓度为。混匀备用(
现用现加)。样本裂解均需要冰上或低温操作,裂解时间20-30分钟。
1、样品前处理:
a)PBS6
对于贴壁细胞:去除培养液,用、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照孔板每孔细
胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)6150-250
对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照孔板每孔细胞量加入
ul裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞管,然后再裂解。/
c)对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例
加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当(
减少裂解液的用量。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。)
2、后处理:
10000-14000g3-5
将裂解后的样品离心分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、
SDSWesternblotting
、和免疫沉淀等操作。
注意事项:
本试剂为强烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出
来,若细胞量多会造成细胞裂解液粘稠:此时可以超声打断基因组或者直接加入蛋白上样缓冲液,
SDS1%
煮沸再离心,离心后直接上样电泳;若想测定浓度,可加入少量(),煮沸后离心测浓度。
本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂,所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒,
请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离
心取上清用于后续实验。
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P10201×PBSPH7.2-7.40.01M
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R0020RIPA组织细胞裂解液
R0030非变性组织细胞裂解液
P10154×蛋白上样缓冲液(含DTT)
PC002BCA法蛋白浓度测定试剂盒
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