有哪些信誉好的足球投注网站- 1、本文档共44页，可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
第五章双向凝胶电泳
(2D);1.蛋白质组分析的技术路线;蛋白质组分析的首要要求;生物学问题的提出;蛋白质组研究的基本技术路线;2.双向电泳技术的发展及原理;双向凝胶电泳的基本原理;IPG胶的材料是Immobilines，为拥有CH2=CH-CO-NH-R结构的8种丙烯酰胺衍生物系列，其中R包含羧基或叔氨基团，它们构成了分布在pH3~10不同值的缓冲体系。根据公布的配方计算后，将适宜的IPG试剂添加至混合物中用于凝胶聚合，在聚合中缓冲基团通过乙烯键共价聚合至聚丙烯酰胺骨架中而形成pH梯度。通过这种方式生成的IPG不会发生电渗透作用，因而可以进行特别稳定的IEF分离达到真正的平衡状态。;三种双向凝胶等电聚焦系统;非变性2D：两向均在非变性条件下进行，这样分离的蛋白质点的等电点和表观分子量同生理条件下获得的这些蛋白的值是一样的；
非变性/SDS-2D：第一向采用非变性IEF，之后在2%SDS溶液中平衡；第二向也在SDS存在的条件下进行。适于分析非共价键连接的蛋白-蛋白间的相互作用。
非变性/还原/SDS-2D：非变性条件下IEF聚焦，之后用8M尿素+5%β-ME+2%SDS进行平衡，再进行第二向SDS电泳。此时分离的蛋白质点可进行点的切取、蛋白酶消化、MALDI-TOF-MS分析鉴定，提供关于断裂二硫键连接的多肽的信息。
变性2D：样品先用2%SDS+5%β-ME+95℃变性5min,IEF在8M尿素+1%NP-40条件下进行，之后胶条用2%SDS+5%β-ME平衡，然后进行SDS。该技术适于DNA序列和多肽结构的分析，或分析被碳氢键连接和其它翻译后修饰所引起的多肽结构微异质性，但此方式显示的大于100KD的蛋白质点少于第三种方式。;3.仪器简介;第二向：;图像分析软件：;4.双向电泳分析中的样品制备;样品的分级处理;样品的溶解;增加样品溶解性的手段;样品中核酸的去除;亚蛋白质组样品的制备;特殊样品的制备;5.双向凝胶电泳技术流程;IPG胶条的重泡胀;加样;蛋白载样量;IPG胶条的蛋白质大约载样量;IPGIEF中pH梯度的选择;预分步收集;聚焦时间的优化;IEF的基本条件;两维间的平衡;二维SDS;聚丙烯酰胺凝胶和转印到膜上的蛋白质的检测;有机染料和银染;负染;胶体扩散染料;有机荧光团染料;金属螯合染料;凝胶的图像处理和??析;2D问题与原因
第一向等电聚焦的问题;2D问题与原因
第二向SDS（垂直系统）的问题;2D问题与原因——染色的问题;Thanks!
文档评论（0）